p35SPPDK-EGFP-Flag(植物用綠色熒光蛋白)是自行研發的植物(如擬南芥等)原生質體表達質粒，可以作為原生質體瞬時轉染的陽性對照質�；蛲ㄟ^構建EGFP融合蛋白而實現觀察目的蛋白的亞細胞定位的目的。EGFP序列的N端有多個限制性酶切位點，根據閱讀框在此插入目的基因就可以表達C端含有EGFP標簽的融合蛋白，利用EGFP的熒光特性可以比較容易地觀察融合蛋白的表達水平和細胞內定位；EGFP序列的C端有2X Flag標簽(DYKDDDDKDYKDDDDK)，可以在融合蛋白質粒轉染原生質體后實現Western Blot檢查融合蛋白表達水平的目的。質粒為氨芐青霉素抗性。
p35SPPDK promoter-EGFP-Flag載體中EGFP基因由35SPPDK強啟動子驅動表達。35SPPDK強啟動子由花椰菜花葉病毒35S(CaMV35S)啟動子與玉米C4PPDK啟動子融合而成，可以高效啟動目的蛋白在植物細胞中的表達。
p35SPPDK-EGFP-Flag載體僅保植物留瞬時轉染所需元件，為避免由于載體過大導致原生質體轉染效率降低而采用精簡的載體結構。此載體不可用于植物穩定遺傳株系的構建。
p35SPPDK-EGFP-Flag采用來自農桿菌的胭脂堿合酶基因的終止子(nopaline synthase terminator，NOS-T)，用于終止RNA聚合酶轉錄，對目的基因的表達進行調控。
p35SPPDK-EGFP-Flag質粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| M13 forward primer(M13 fwd) | 1-17 |
| 35SPPDK promoter | 84-593 |
| EGFP | 617-1333 |
| 2X Flag-tag | 1355-1402 |
| NOS terminator | 1411-1663 |
| M13 reverse primer(M13 rev) | 1702-1718 |
| lac operator | 1726-1742 |
| lac promoter | 1750-1780 |
| CAP binding site | 1795-1816 |
| pUC origin | 2104-2692 |
| Ampicililin resistance ORF | 2863-3723 |
| Ampicililin promoter | 3724-3828 |
p35SPPDK-EGFP-Flag質粒(4301bp)的圖譜如下：
p35SPPDK-EGFP-Flag的詳細圖譜見說明書：https://www.beyotime.com/Manual/D2627 p35SPPDK-EGFP-Flag(植物用綠色熒光蛋白).pdf
p35SPPDK-EGFP-Flag中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut p35SPPDK-EGFP-Flag包括：
| AccI | AfeI | AgeI | AscI | AsiSI | AvrII | BbvCI |
| BclI | BfuAI | BglII | BlpI | BmtI | BsiWI | BspDI |
| BspMI | BstBI | BstEII | BstXI | BstZ17I | Bsu36I | ClaI |
| DraIII | EagI | EcoNI | FseI | HincII | HpaI | MfeI |
| MluI | MscI | NaeI | NgoMIV | NheI | NotI | NruI |
| PacI | PflFI | PflMI | PmeI | PmlI | PpuMI | PsiI |
| PspXI | RsrII | SacII | SalI | SbfI | SexAI | SfiI |
| SgrAI | SmaI | SnaBI | SphI | SrfI | SwaI | TspMI |
| Tth111I | XcmI | XmaI |
p35SPPDK-EGFP-Flag中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut p35SPPDK-EGFP- Flag once)包括：
| AatII | G,ACGT`C | 3858 | EcoRV | GAT|ATC | 337 |
| Acc65I | G`GTAC,C | 611 | KasI | G`GCGC,C | 4158 |
| AflII | A`CRYG,T | 1440 | KpnI | G,GTAC`C | 616 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 2936 | NarI | GG`CG,CC | 4159 |
| AlwNI | CAG,NNN`CTG | 2459 | NcoI | C`CATG,G | 616 |
| ApaI | G,GGCC`C | 396 | NdeI | CA`TA,TG | 4108 |
| ApoI | R`AATT,Y | 1687 | NsiI | A,TGCA`T | 1531 |
| AvaI | C`YCGR,G | 26 | PaeR7I | C`TCGA,G | 26 |
| BaeI | ,(N)5`(N)1ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5` | 598 | PluTI | G,GCGC`C | 4162 |
| BamHI | G`GATC,C | 597 | PshAI | GACNN|NNGTC | 245 |
| BmgBI | CAC|GTC | 308 | PspOMI | G`GGCC,C | 392 |
| BsaAI | YAC|GTR | 556 | PstI | C,TGCA`G | 1411 |
| BsaBI | GATNN|NNATC | 1474 | SacI | G,AGCT`C | 523 |
| BsaI | GGTCTCN`NNNN, | 2997 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 1927 |
| BsmI | G`AATG,CN` | 437 | ScaI | AGT|ACT | 3417 |
| BsoBI | C`YCGR,G | 26 | SfoI | GGC|GCC | 4160 |
| BspEI | T`CCGG,A | 527 | SpeI | A`CTAG,T | 1335 |
| BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 1927 | SspI | AAT|ATT | 3740 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 1326 | StuI | AGG|CCT | 1349 |
| BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 4105 | StyI | C`CWWG,G | 615 |
| CspCI | NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 300 | XbaI | T`CTAG,A | 603 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 525 | XhoI | C`TCGA,G | 27 |
| EcoO109I | RG`GNC,CY | 3912 | ZraI | GAC|GTC | 3856 |
| EcoRI | G`AATT,C | 1688 |
p35SPPDK-EGFP-Flag質�？墒褂玫臏y序引物序列如下：
35SPPDK forward primer(473-494): 5’-CCTTTTCGCTGTACTCTCTCGC-3’
EGFP reverse primer(670-689): 5’-CGTTTACGTCGCCGTCCAG-3’
p35SPPDK-EGFP-Flag的全序列信息：D2627 p35SPPDK-EGFP-Flag.txt
包裝清單：
| 產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
| D2627-1µg | p35SPPDK-EGFP-Flag | 1μg |
| D2627-100µg | p35SPPDK-EGFP-Flag | 100μg |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存。
注意事項：
本質粒未經書面許可不得用于任何商業用途，也不得移交給訂貨人所在實驗室外的任何個人或單位。
本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1.首次使用1 µg包裝的本產品時，請先取少量本質粒轉化大腸桿菌，進行質粒小量、中量或大量抽提后再用于后續用途。抽提獲得的質粒可以通過酶切電泳進行鑒定，或通過測序進行鑒定。
2.100 µg包裝的本產品質粒濃度為0.1 µg/µl，共1ml�？梢灾苯佑糜诿盖�。用于植物原生質體轉化需進行質粒大量抽提。
