| 名稱(Name) | 重組腸激酶；Recombinant Enterokinase |
| 別名(Synonyms) | 重組腸激酶輕鏈; Enterokinase, light chain; Enteropeptidase; Enterokinase; Serine protease 7; ENTK; MGC133046; PRSS7; TMPRSS15; protease, serine, 7 (enterokinase); PRSS7enteropeptidase; Serine protease 7; Transmembrane protease serine 15; transmembrane protease, serine 15 |
| 產品簡介(Background) | 腸激酶是一種高度特異性絲氨酸蛋白酶，天然腸激酶由1條結構亞基(重鏈)和1條催化弧基 (輕鏈)構成, 兩者通過1個分子間二硫鍵結合, 結構亞基負責將催化亞基固定在小腸刷狀緣膜上并引導它向腸腔移動, 催化亞基可以特異性識別Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列并沿序列的羧基端切下, 將胰蛋白酶原活化為胰蛋白酶, 從而啟動各種酶原活化的級聯。重組牛腸激酶是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段，該酶經HPLC純化，純度高，特異性高，不含其它蛋白酶，用于去除N-末端和Met-N-末端融合蛋白中的FLAG多肽(DDDDK, 并且K后面不是脯氨酸)，但不移除C端FLAG。腸激酶具有較寬pH范圍(4.5-9.5)和較寬溫度范圍。 |
| 產品用途(Applications) | 從N-末端和Met-N-末端融合蛋白中去除標記肽； 蛋白質修飾和氨基酸序列測定。 |
| 外觀(Physical appearance) | 澄清、無色至淡黃色液體 |
| 活性(Biological activity) | ≥ 5.0U/µl，一般為10U/µl，約為20,000U/mg pro，具體參考每批次標簽或COA。 |
| 活力單位(Unit definition) | 1U定義為在25℃，12h~16h之內，將0.5mg保存于25mM Tris-HCl (pH8.0)緩沖液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。 |
| 純度(Purity) | 單一主條帶 |
| 蛋白含量(Protein content) | - |
| 配方(Formulation) | Bovine EK is supplied in 50mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.5M NaCl and 50% glycerol. |
| 使用方法(Recommended usage) | 1) 25℃酶切(按照酶活性定義舉例)： 25mM Tris-HCl (pH8.0)體系中含Flag融合蛋白0.1-1mg/ml (蛋白總量50-100µg)，重組EK 0.1-0.2U。25℃酶切過夜或16-24h，在NC膜上用Dot blot的方法并用Flag抗體檢測酶切效果， 或使用SDS-PAGE進行酶切效果檢測。注：不建議37℃條件下酶切，可能會有非特異性酶切出現。 2) 4℃低溫酶切條件： 4℃條件下也可對底物進行有效酶切，但需要將酶切時間延長至48-64h，或增加2-3倍酶量。 3) 酶切優化和放大優化： 優化：可以對酶切條件進行優化，例如緩沖液pH、融合蛋白濃度、EK的量以及酶切時間，使融合蛋白能在穩定條件下被酶切，用SDS-PAGE檢測酶切效果。 放大：選擇優化后的反應條件，按該條件等比例放大，用SDS-PAGE檢測酶切效果。 4) 去除重組腸激酶的方法： 如果使用親和層析，可以利用胰蛋白酶抑制劑親和膠，由于腸激酶是一種絲氨酸蛋白酶，胰蛋白酶抑制劑可以與腸激酶結合，從而達到純化目的。建議利用離子交換層析分離去除微量的腸激酶。 pH8.0，腸激酶與DEAE膠結合，并且在0.15M NaCl中可以被洗脫。可以利用目的蛋白與腸激酶電荷以及與DEAE膠的結合以及洗脫的不同條件將二者進行分離。 5) 在咪唑<100mM，或NaCl<50mM，或甘油< 5%進行酶切，酶的用量與蛋白的比例不變。在>200mM咪唑，或>200mM NaCl，或>5%甘油的條件下，酶切效果會受影響。可參照以下推薦方法進行酶切： a.為獲得理想酶切結果，請將樣品透析至25mM Tris-HCl (pH8.0)緩沖液中，再進行酶切。 b.若不便透析，可將樣品稀釋，咪唑含量在100mM以下，NaCl濃度在50mM以下，甘油濃度小于5%以下進行酶切，酶的用量與蛋白的比例不變(即1U酶切500μg蛋白)。 c.如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種，且不便去除，此時適當增加酶量或延長酶切時間，也可達到較好酶切效果。 |
| 穩定性(Stability) | -20℃，24個月穩定；25℃，一周內，無活性損失。緩沖體系：50mM Tris-HCl，pH8.0，250mM NaCl，2mM Ca2+，50%甘油。 酶液反復凍融穩定性：反復凍融5次，無活性損失。 |
| 氨基酸序列(Amino acid sequence) | IVGGSDSRE GAWPWVVALY FDDQQVCGAS LVSRDWLVSA AHCVYGRNME PSKWKAVLGL HMASNLTSPQ IETRLIDQIV INPHYNKRRK NNDIAMMHLE MKVNYTDYIQ PICLPEENQV FPPGRICSIA GWGALIYQGS TADVLQEADV PLLSNEKCQQ QMPEYNITEN MVCAGYEAGG VDSCQGDSGG PLMCQENNRW LLAGVTSFGY QCALPNRPGV YARVPRFTEW IQSFLH 備注：本氨基酸序列僅供參考，實際氨基酸長度或序列可能有一定變化。 |
| 產品優勢(Advantage) | 無動物源性：重組生產，無外源性的病毒污染，生產過程不使用任何動物源原料。 質量穩定：批量生產，可保證穩定連續的批次生產；產品批次間無差異，質量穩定。 純度高：比活高；宿主蛋白殘留小于生物制品限度要求。 凍干粉：易于儲存和運輸。 符合法規要求：生產設備和生產環境符合相關法規要求，生產過程完全遵循NSF ISO 9001:2015質量體系并符合GMP指導原則。 |
包裝清單：
| 產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
| P4237-100U | 重組腸激酶 | 100U |
| P4237-500U | 重組腸激酶 | 500U |
| P4237-1000U | 重組腸激酶 | 1000U |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，兩年有效。
注意事項：
本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1.收到產品后請立即按照說明書推薦的條件保存。除非特別注明，相關產品均為凍干粉，由于微量的蛋白在凍干過程中沉積在管內，形成很薄或不可見的蛋白層，所以在打開管蓋前，我們建議在離心機中約8,000-12,000g離心10-30秒，使附著在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底。
2.大多數細胞因子或重組蛋白的凍干粉是非常容易溶解的，一般用移液槍的槍頭輕吹幾下或者輕輕搖晃瓶子，即可使細胞因子或重組蛋白完全溶解。請勿用vortex劇烈振蕩，以免蛋白變性而失活。
3.具體的最佳工作濃度請自行參考相關文獻，或者根據實驗目的，以及特定細胞和動物，通過實驗進行摸索和優化。
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