Lambda Protein Phosphatase (重組λ蛋白磷酸酶),即λ Protein Phosphatase,是一種錳離子(Mn2+)依賴的重組表達純化的磷酸蛋白酶,可以對磷酸化的絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸和組氨酸殘基進行脫磷酸反應。
本產品是大腸桿菌重組表達的帶6×His標簽的重組λ磷酸酶。該磷酸酶由λ噬菌體開放閱讀框ORF221所編碼,編碼產物共包含221個氨基酸殘基。
Lambda Protein Phosphatase可以用于蛋白的去磷酸化,從而可以用于研究蛋白磷酸化與其活性和結構的關系,以及驗證蛋白磷酸化位點抗體的特異性等。
酶活性單位定義:在30℃ pH7.5條件下反應1分鐘,能夠水解1nmol p-nitrophenyl phosphate所需的酶量定義為一個活性單位。
Lambda Protein Phosphatase酶活性鑒定結果參考圖1。
圖1. Lambda Protein Phosphatase酶活測定實驗圖。左圖:pNP標準曲線。右圖:Lambda Protein Phosphatase按照30、40、50、80、100、200、500倍稀釋后,在50µl反應體系中的酶量分別為0.27µg、0.20µg、0.16µg、0.10µg、0.08µg、0.04µg、0.016µg,并與100mM pNPP在1×Lambda Protein Phosphatase Buffer和1×MnCl2中在30℃反應5min后,加入12.5µl 3M NaOH終止反應,測定產生的pNP在405nm吸光度,并根據pNP標準曲線,計算Lambda Protein Phosphatase酶活性。不同批次檢測出來的酶活性會略有差別。
酶分子量大小:約26kDa。
純度:純度大于95%。
Lambda Protein Phosphatase存儲液組成為:50mM This-HCl (pH7.5),100mM NaCl,0.1mM MnCl2,0.1mM EGTA,2mM dithiothreitol (DTT),0.01%Brij35,50%(v/v)甘油。
10× Lambda Protein Phosphatase Buffer組成為:500mM Hepes (pH7.5),100mM NaCl,20mM DTT,0.1% Brij35。
10× MnCl2組成為:10mM MnCl2。
失活:在50mM EDTA存在的條件下,65℃加熱1小時可使Lambda Protein Phosphatase失活。
包裝清單:
產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
P2316S-1 | Lambda Protein Phosphatase (70U/µl) | 300µl |
P2316S-2 | 10× Lambda Protein Phosphatase Buffer | 1ml |
P2316S-3 | 10× MnCl2 (10mM MnCl2) | 1ml |
— | 說明書 | 1份 |
產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
P2316M-1 | Lambda Protein Phosphatase (70U/µl) | 1.5ml |
P2316M-2 | 10× Lambda Protein Phosphatase Buffer | 5ml |
P2316M-3 | 10× MnCl2 (10mM MnCl2) | 5ml |
— | 說明書 | 1份 |
保存條件:
-20℃保存,一年有效。如果希望保存更長時間,可以適當分裝后-80℃凍存。
注意事項:
反復凍融會導致Lambda Protein Phosphatase酶活性降低。如果希望在-80℃凍存,建議適當分裝后保存,以方便后續使用。在-20℃存放時不會結凍,但在-80℃凍存時會結凍。
10mM釩離子(vanadate ions)能抑制Lambda Protein Phosphatase活性約90%,50mM EDTA可以抑制Lambda Protein Phosphatase活性約95%,1% Triton X-100、0.4% Nonidet P-40、0.025% Tween 20、0.5M NaCl、0.1mM ATP、10μg/ml pepstatin A、10μg/ml leupeptin, 10μg/ml aprotinin, 0.5mM PMSF、1mM benzamidine不影響Lambda Protein Phosphatase的酶活性。
需要注意的是不同蛋白脫磷酸化反應的速率是不同的,該酶的最佳反應溫度是30℃。某些樣品的粗提液用該酶進行去磷酸化處理時,請注意用盡可能短的時間進行處理,同時添加適量蛋白酶抑制劑(P1005、P1010、ST505或ST506等)以減少目的蛋白的降解。
本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明:
1.Lambda Protein Phosphatase對不同蛋白的脫磷酸化反應有不同活性,所以在實際應用中,我們建議對酶濃度和反應時間進行優化。反應體系中,反應緩沖液為1× Lambda Protein Phosphatase Buffer并且同時加入1× MnCl2 (最終濃度為1mM)。
2.以一般的去磷酸化反應為例:在50μl反應體系中,100U的Lambda Protein Phosphatase在30分鐘內可以除去相當于5μM的磷酸化的蛋白(單磷酸化)中約100%的磷酸。