PCR純化試劑盒(PCR Clean Up Kit),也稱DNA純化試劑盒(DNA Purification Kit)是一種用于PCR產物純化或從多種DNA反應體系中純化DNA的試劑盒。
適用于PCR反應后去除引物、酶、礦物油、甘油、鹽等雜質;也同樣適用于酶切、連接、磷酸化、補平或切平、隨機引物等反應后的DNA純化。純化所得DNA可直接用于酶切、連接、轉化細菌、測序、PCR、雜交等后續操作。本試劑盒適用于純化100bp-10kb DNA,長至30個堿基的引物均可被完全去除。
本試劑盒采用了一種新型的DNA純化柱。在特定條件下,使DNA能在離心過柱的瞬間,結合到DNA純化柱上,在一定條件下又能將DNA充分洗脫,從而實現DNA的快速純化。無需酚氯仿抽提,無需酒精沉淀,12個樣品只需不足15分鐘即可完成。
每個DNA純化柱可以結合的DNA量的上限約為15微克。
DNA回收效率約為90%。接近100bp或10kb的DNA片段回收效率要略低一些,大于10kb的DNA回收效率迅速下降。另外如果樣品中DNA含量特別低也會導致回收效率下降。本試劑盒的純化效果參見圖1。
圖1. 本試劑盒純化效果圖。本圖僅作參考,不同的樣品不同的純化條件,實際的純化效果可能和上圖有一定的差別。
本試劑盒足夠純化50個平均體積不超過400微升的DNA樣品。
包裝清單:
產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
D0033-1 | 溶液I (DNA純化結合液) | 20ml |
D0033-2 | 溶液II (洗滌液) | 26ml (第一次使用前加入39ml無水乙醇) |
D0033-3 | 溶液III (洗脫液) | 3ml |
D0033-4 | DNA純化柱及廢液收集管 | 50套 |
— | 說明書 | 1份 |
保存條件:
室溫保存,一年有效。
注意事項:
第一次使用前在溶液II(洗滌液)中加入39ml無水乙醇,混勻,并在瓶上做好標記。
溶液I對人體有刺激性,操作時請小心,并注意適當防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
本試劑盒所有操作均在室溫進行,操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進行。
廢液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丟棄。
本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明:
1. 加入等體積的溶液I,混勻。
例如DNA樣品體積為100微升,則加100微升溶液I。如果等體積混合后體積較大,可以把部分樣品加入到純化柱內,經離心處理后,再加入剩余的樣品繼續處理。礦物油對于本試劑盒沒有干擾。
2. 把與溶液I等體積混勻的樣品加入到DNA純化柱內,室溫放置1分鐘。通常室溫放置數秒待溶液浸潤到純化柱中即可。
3. 最高速(16,000g,約12,000-14,000rmp左右)離心1分鐘,倒棄收集管內的液體。
注意:這一步盡量要達到16,000g,較低離心速度會導致回收效率下降。
4. 在DNA純化柱內加入700微升溶液II,室溫放置1分鐘。
5. 最高速離心1分鐘,洗去雜質。倒棄收集管內的液體。
6. 再加入500微升溶液II,最高速離心1分鐘,進一步洗去雜質。倒棄收集管內的液體。
7. 最高速再離心1分鐘,除去殘留液體并讓殘留的乙醇充分揮發。
8. 將DNA純化柱置于1.5毫升離心管上,加入50微升溶液III至管內柱面上,放置1分鐘。
用1.5ml離心管作為收集管。溶液III需要直接加至管內柱面中央,使液體被純化柱吸收。如果不慎將溶液III沾在管壁上,一定要震動管子,使液體滑落到管底,以便被純化柱吸收。也可以用重蒸水或Milli-Q級純水替代溶液III,但是水的pH值應不小于6.5。如需得到較高濃度的DNA,可以只加20-30微升溶液III,但產量會略有下降。放置較長時間例如3-5分鐘,會對提高產量略有幫助。
9. 最高速離心1分鐘,所得液體即為高純度DNA。