本產品是基于離心柱/硅膠膜DNA吸附原理的、專門用于從新鮮或冷凍的動物(包括人和禽類)抗凝全血中提取基因組DNA的大提試劑,它是柱式血液DNAout
(CAT#:60306-50)的大提升級版,具有下列特點:
1. 處理量更大,一次可以處理5-50 mL血液(對哺乳動物血液)。
2. 吸附量大,一個離心吸附柱最多可以吸附800 μg的DNA。
3. DNA純凈,OD260/280在1.8-2.0之間。不含蛋白質和RNA污染,可直接用 于PCR、酶切、Southern雜交等實驗。
4. 產量高,一般為200-600 μg/10 mL全血(對哺乳動物血液而言)。
5. 操作簡單,整個過程約20分鐘,全室溫操作,適合大規模樣品處理。
6. 安全無毒,本試劑盒不使用苯酚和氯仿,對人體無毒,無腐蝕性和刺激性氣味。
7. 本產品也可用于禽類血液等非哺乳動物血液,但各成分用量需要適當優化。
將5-25 mL抗凝血液與等量的紅細胞裂解液在自備的10-50 mL的塑料離心管中輕柔混勻,離心5分鐘,小心吸棄上清后將細胞沉淀重懸5-25 mL于A型紅細胞裂解液中,輕柔混勻,離心5分鐘獲取白細胞沉淀,加入5 mL溶液A,充分吹打混勻后轉移到大提離心吸附柱中,離心2分鐘,用25 mL通用洗柱液洗滌吸附柱兩次,短暫離心甩干,最后加0.2-1 mL DNA洗脫液洗脫DNA待用。
7. 本產品也可用于禽類血液等非哺乳動物血液,但各成分用量需要適當優化。
用本產品提取4℃保存(左邊四個樣品)和-20℃保存(右邊四個樣品)的抗凝兔血,每個樣品的使用量是10 mL,得到的DNA最后用5 mL DNA 洗脫液洗脫,各取10 μL上樣,在0.8%瓊脂糖凝膠和1×SuperBuffer-2中300 V電泳10分鐘后直接在UV燈 下照相。