生物素檢測封閉試劑盒(Biotin Assay Blocking Kit),是一種主要用于SABC (Streptavidin-Biotin Complex)法或ABC (Avidin-Biotin Complex)法等基于生物素和鏈霉親和素(Streptavidin)或親和素(Avidin)進行免疫組化(Immunohistochemistry, IHC)、免疫細胞化學(Immunocytochemistry, ICC)、免疫熒光(immunofluorescence, IF)、原位核酸雜交等檢測過程中,對組織及細胞樣品進行封閉以顯著降低背景的試劑盒。
基于生物素的檢測技術,例如SABC法、ABC法等可以顯著提高檢測靈敏度,是常見的實驗室檢測技術。但有時會受內源性的生物素和生物素結合蛋白等的影響而產生一定的背景。
本試劑盒不僅可以封閉內源性的生物素和生物素結合蛋白,也能封閉樣本對于streptavidin或avidin的非特異性結合。
按照本試劑盒推薦的條件,生物素檢測相關的封閉可以和常規的免疫染色封閉同時進行,顯著節約封閉時間。
一些細胞和組織,如腎臟、肝臟和脾臟等含有一定量的內源性生物素或者生物素結合蛋白,利用SABC法或ABC法等進行IHC、ICC、IF和原位雜交等實驗時,它們會結合streptavidin或avidin、生物素標記的辣根過氧化物酶(biotinylated horseradish peroxidase)或生物素標記的堿性磷酸酶(biotinylated alkaline phosphatase)等而產生較高的非特異性染色背景,從而產生假陽性結果。此外,樣本和streptavidin或avdin可能存在的非特異性結合也會導致一定的背景染色。因此,使用生物素檢測封閉液對細胞和組織進行封閉預處理是非常必要的,使用本試劑盒可以有效減少非特異性染色,提高檢測靈敏度。
本試劑盒含兩種封閉液,Biotin Blocking Buffer (100X)中含有streptavidin等,可以充分結合并封閉內源性的生物素,并可以減少后續對于標記的streptavidin的非特異性結合;Streptavidin/Biotin-Binding Blocking Buffer (100X)中含有生物素,可以充分封閉內源性生物素結合蛋白以及前一步封閉時結合的streptavidin。通過兩步法的封閉,可以達到顯著降低背景的目的。
本試劑盒適用于冰凍切片和石蠟切片的封閉,也適用于培養細胞的封閉。
按照每封閉一個樣品需要兩種封閉液各100μl計算,一個包裝的本試劑盒可以封閉200個樣品。
包裝清單:
產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
P0101-1 | Biotin Blocking Buffer (100X) | 200μl |
P0101-2 | Streptavidin/Biotin-Binding Blocking Buffer (100X) | 200μl |
— | 說明書 | 1份 |
保存條件:
-20℃保存。
注意事項:
使用本試劑盒推薦的條件進行封閉后,無需再進行常規的免疫染色封閉操作步驟。推薦條件下,本試劑盒能同時進行生物素相關的封閉和常規封閉。
本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明:
1. 對于組織切片或細胞樣品或膜,在與堿性磷酸酯酶標記的抗體或其它形式的探針孵育后,用適當洗滌液洗滌3-5次,每次3-5分鐘。對于檢測內源性堿性磷酸酯酶的組織或細胞樣品,在適當固定后,也用適當洗滌液洗滌3-5次,每次3-5分鐘。
2. 按照如下比例依次加入各溶液,混勻后即配制成BCIP/NBT染色工作液:
堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 | 3ml | 10ml |
BCIP溶液(300X) | 10μl | 33μl |
NBT溶液(150X) | 20μl | 66μl |
BCIP/NBT染色工作液 | 3.03ml | 10.1ml |
3. 最后一次洗滌完畢后,去除洗滌液,加入適量BCIP/NBT染色工作液,確保能充分覆蓋樣品。
4. 室溫避光孵育5-30分鐘或更長時間(可長達24小時),直至顯色至預期深淺。
5. 去除BCIP/NBT染色工作液,用蒸餾水洗滌1-2次即可終止顯色反應。
6. 對于組織切片或細胞樣品,顯色反應終止后,如有必要可以用中性紅染色液(neutral red staining solution)染色,以便于觀察。對于膜,顯色反應終止后,可以室溫晾干避光保存