細(xì)胞凋亡是一種正常的生物學(xué)現(xiàn)象,其顯著特點(diǎn)之一是細(xì)胞染色體被一種內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶降解,酶切部位在核小體之間的DNA上,所以這種降解具有位置專一異。由于真核生物相鄰核小體之間的DNA長(zhǎng)度(包括纏繞在核小體上的部分和連接部分)一般是180-200bp,所以細(xì)胞凋亡所產(chǎn)生的凋亡DNA片段都是180-200bp 的整倍數(shù),電泳時(shí)呈非常有規(guī)律的梯狀圖譜,故稱之為凋亡DNA Ladder。由于只有凋亡細(xì)胞才產(chǎn)生凋亡DNA Ladder,所以可以通過檢測(cè)樣品DNA中是否有DNA Ladder來(lái)判斷組織中是否有細(xì)胞凋亡過程發(fā)生。本產(chǎn)品就是專門用來(lái)從組織和培養(yǎng)細(xì)胞中提取凋亡DNA的產(chǎn)品,它具有下列特點(diǎn):
1. 對(duì)小片段DNA的回收率高于普通的基因組DNA提取方法。
2. 對(duì)大片段DNA回收率低于普通的基因組DNA提取方法,降低了電泳時(shí)它對(duì)凋亡DNA的干擾,增加了檢測(cè)的特異性。
3. 使用一步式細(xì)胞裂解法,操作上比兩步法簡(jiǎn)單(兩步法需要先分離細(xì)胞核和胞漿,再?gòu)陌麧{中分離凋亡DNA),同時(shí)DNA釋放更充分,DNA產(chǎn)量更高。
4. 柱式操作,得到的DNA純度高,可以直接用于電泳或標(biāo)記。
適用于血液,培養(yǎng)細(xì)胞和實(shí)體組織
在1 mL溶液A中收集的白細(xì)胞、培養(yǎng)細(xì)胞或組織,吹打裂解(若材料為組織塊, 還需要?jiǎng)驖{),65℃保溫5分鐘,室溫離心兩分鐘,在上清中加0.2倍體積的氯仿, 振蕩混勻后離心兩分鐘,上清中加等體積的溶液B,分兩次上柱,用通用洗柱液洗1-2次,短暫干甩后用50μL DNA洗脫液洗脫即得DNA。