本產品是真菌DNAOUT的柱式升級產品,能夠破裂各種真菌堅硬的外殼。同時使用硅膠膜DNA純化技術,得到的DNA適用于各種后續實驗。
1. DNA純凈,OD260/280一般都在1.9左右?芍苯佑糜赑CR、酶切、雜交 等。DNA產量在2-10 μg/mL飽和菌液,DNA片段大小在30-50 Kb左右。
2. 操作簡單,整個過程約15分鐘。
3. 能處理真菌菌絲、孢子和子實體等各種形式的真菌樣品。
4. 安全無毒,本試劑盒對人體無毒,無腐蝕性和刺激性氣味。
5. 適合于各種真菌,包括酵母(S. cerevisiae、S. pomb、Pichia pastoris、Cryptococcus neoformans、Myxozyma mucillagina )、動物病原真菌(如:Candida albicans、Aspergillus niger )和植物病原真菌(如: Collectotrichum musae、Fusarium oxysporum)。
將0.1-3 mL 真菌細胞沉淀或0.1g左右的真菌菌絲、孢子和子實體在液氮中研磨,轉移到1.5 mL塑料離心管中,加入1 mL溶液A,吹打混勻,65℃保溫5分鐘后離心1分鐘,轉移上清到一新離心管中,加入等體積溶液B,混勻,冰浴5分鐘,離心1分鐘,轉移上清到一新離心管中,加入1.5倍體積的溶液C,混勻后轉移到離心吸附柱中,室溫放置5分鐘后離心半分鐘,用通用洗柱液洗兩次,空甩半分鐘,將離心吸附柱轉移到新的離心管中,加0.1 mL DNA洗脫液,室溫離心1分鐘即得DNA
用本產品提取Candida albicans(A) 、 Saccharomyces cerevisiae(B)、和Aspergillus niger (C)三種真菌的基因組DNA,最后用20 μLDNA洗脫液洗脫,取10 μL上樣,在0.8%瓊脂糖凝膠和1×SuperBuffer-2中300 V電泳5分鐘后直接在UV燈下照相。使用的染料是綠如藍。