分離純化環狀DNA(質粒DNA、線粒體DNA、葉綠體DNA和某些病毒DNA) 的時候經常需要去除其中的基因組DNA污染,否則會對后續的PCR、WGA和測序等反應產生干擾。而基因組DNA一般都十分巨大,無論是線狀(如真核細菌基因組DNA)還是環狀(如細菌DNA),經過常規的DNA純化過程都會變成20-50 Kb大小的線狀DNA,而上述環狀DNA一般還能保持環狀構型。根據這一特點,本公司開發了專門用于去除線狀DNA的本產品,它有如下優點:
1. 即開即用,不需用戶花費大量時間去摸索各種條件。
2. 酶法去除線性DNA,使線狀DNA污染降級幾個數量級,不會干擾后續試驗。
3. 柱式法純化回收環狀DNA,能快速高效清除殘留酶,得到的DNA可直接使用。
4. 酶法處理不依賴于DNA序列,適于于任何線狀DNA。而內切酶去除線狀DNA則需要預先確知其在環狀DNA上沒有酶切位點。
5. 適用的環狀DNA包括質粒DNA、線粒體DNA、葉綠體DNA、環狀病毒DNA等。
6. 得到的環狀DNA可用于多種后續試驗,尤其是WGA、PCR和測序等對污染敏感的試驗。
以30 μL反應體系為例,其他體系各成分用量按比例調整。在離心管中加入3 μL溶液A、2-5 μg DNA樣品、1 μL溶液B、1 μL溶液C,補水到30 μL,37℃保溫16小時,可電泳檢查去除效果。65℃保溫10分鐘滅活酶,然后用微量核酸沉淀劑沉淀回收環狀DNA。