本產品是在分枝桿菌DNAOUT(CAT#:70702)基礎上開發的柱式升級產品,具有下列特點:
1. 操作比分枝桿菌DNAOUT更加簡單,整個提取過程只需要10-20分鐘。
2. 得到DNA的OD260/280一般在1.7-2.0之間,產量一般在2-5 μg/mg菌體。可用于各種后續實驗,用于PCR時的檢測靈敏度為10-100 CFU/mL液體樣品。
3. 既可以使用培養的細菌,也可以使用痰液、精液、血液、腦脊液等液體樣品, 還可以使用動物和人體的組織樣品。
4. 適用于各種分枝桿菌,包括M. tuberculosis、M. avium、M. ulcerans。
5. 價廉物美,與國外同類產品相比質量相當,但價格便宜。價廉物美,性價比遠低于國外同類產品。
6. 適用于各種材料,包括血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養細胞上清液等無細胞材料。
使用及效果
根據樣品不同進行不同預處理,在得到的細菌沉淀中,分別加入0.15 mL溶液A、0.3 mL自備氯仿和0.3 mL溶液B,吹打混勻后-20℃放置直到溶液凝固,室溫融化后離心5分鐘,將上清液轉移到離心吸附柱中離心1分鐘,用通用洗柱液洗滌兩次,加入適量DNA洗脫液洗脫即得基因組DNA。
結核桿菌的兩種感染途徑
一、原發感染:肺結核可因吸入含菌的塵埃、飛沫引起。少數活的結核桿菌一旦進入肺泡,即被巨噬細胞吞噬。由于菌體成分硫酸腦苷脂能抵抗胞內的溶菌殺傷作用,使結核桿菌在肺泡內大量生長繁殖,導致巨噬細胞裂解,釋出的結核桿菌再被吞噬而重復上述過程,引起滲出性炎性病灶,稱為原發灶。原發灶內的結核桿菌可經淋巴管擴散到肺門淋巴結,引起肺門淋巴結腫大。原發灶、淋巴管炎和腫大的肺門淋巴結稱為原發綜合征,胸透為啞鈴形陰影,此為原發感染的重要特征。感染3- 6周,機體產生特異性細胞免疫,同時也出現變態反應。病灶中結核桿菌細胞壁磷脂,一方面刺激巨噬細胞轉化為上皮樣細胞,后者相互融合或經核分裂形成多核巨細胞,另一方面抑制蛋白酶對組織的溶解,使病灶組織溶解不完全,產生干酪樣壞死, 周圍包著上皮樣細胞,外有淋巴細胞、巨噬細胞和成纖維細胞,形成結核結節。此即結核的典型病理特征。感染后約5%可發展為活動性肺結核,其中少數患者因免疫低下,可經血、淋巴結、骨、關節、腎、腦膜引起相應的結核病。90% 以上的原發感染形成纖維化或鈣化,不治而愈,但病灶內常仍有一定量的結核桿菌長期潛伏,不但能刺激機體產生免疫也可成為日后內源性感染的淵源。
二、原發后感染:病灶亦以肺部為多見。病菌可以是外來的(外源性感染)或原就潛伏在病灶內的(內源性感染)。由于機體已有特異性細胞免疫,因此原發后感染的特點是病灶多局限,一般不累及鄰近的淋巴結,被纖維囊包圍的干酪樣壞死灶可鈣化而痊愈。若干酪樣結節破潰,排入鄰近支氣管,則可形成空洞并釋放大量結核菌至痰中