本試劑盒是用于質粒DNA大量制備與純化的試劑盒。菌體先經堿裂解法處理, 再通過離心吸附柱,專一結合DNA,最后洗去雜質,高效快速提取質粒DNA,全套操作可以在30分鐘之內完成。使用本試劑盒可從50-100 mL過夜培養的菌液純化得到高達300-500 μg的高純度質粒DNA(OD260/OD280=1.8-2.0),可以直接用于酶切、轉化、測序及PCR等。
1. 快速、步驟少,整個操作在半個小時之內完成。
2. 離心柱最大吸附量為500 μg,100mL高拷貝的菌液一般能得到700 μg左右的質粒DNA,100 mL低拷貝的菌液一般能得到150-350 μg質粒DNA。
3. 純度高,采用本試劑盒提取的質粒OD比值在1.8-2.0之間。
4. 產量高,每毫升過夜培養的細菌可以提取到2-5 μg/mL。
5. 用途廣,適用于低拷貝和高拷貝質粒。
6. 價格低,比多數國內同類產品的價格更便宜。
使用及效果
收集50-100 mL過夜培養飽和菌液,離心棄上清后用6 mL溶液A重懸沉淀,再與6 mL溶液B混勻,再加入8 mL溶液C,混勻,室溫靜止2分鐘,離心10分鐘, 將上清轉移到DNA純化柱中,靜置2分鐘,離心后棄收集管中的廢液,用10 mL的通用洗柱液洗滌離心柱兩次。干甩一次,將離心柱置于新的50 mL離心管(自備)中,用1 mL DNA洗脫液洗脫2-5次即得質粒DNA。
圖注:高拷貝質粒pWXL001從70 mL過夜培養菌液中提取得到。從左到右分別為第一次,第二次,第三次,第四次和第五次洗脫,每次洗脫體積均為1 mL。上樣體積為10 μL,最后在0.8%瓊脂糖凝膠中電泳后紫外觀察。使用的染料為綠如藍染料,電泳緩沖液為超快電泳液。第一次洗脫約25% 的質粒DNA,第二次洗脫約35%的質粒DNA;第三次洗脫約20%的質粒DNA;第四次洗脫約10%的質粒DNA;第五次洗脫約8%的質粒DNA。本次實驗質粒DNA產量是465.5 μg,產率是6.65 μg/mL(實驗編號305095)。