產品及特點
本產品是改良型的SYBR Green I,它跟常規的SYBR Green I相比檢測靈敏度相當,但具有耐熱、耐水解的特點,所以十分穩定,使用更加方便。
1. 穩定,本產品濃縮液可以在常溫下存放一年以上,方便運輸及保存。本產品的1×工作液在常溫下的半衰期為120多天,比常規的SYBR Green I(5天)長20倍以上。
2. 使用方便多樣,既可以在制備凝膠時加入到融化的瓊脂糖凝膠中,還可以象常規的SYBR Green I、SYBR Gold、SYBR safe、GelStar一樣用于電泳后染色。
3. 靈敏,其檢測靈敏度跟SYBR Green I相同,比EB靈敏200-100倍。
4. 低毒、環保、健康。
5. 可檢測各種核酸分子,包括dsDNA、ssDNA、RNA和Oligo。
6. 兼容性好,不但與常用的TAE、TBE和SuperBuffer-2等電泳緩沖液兼容,還 與常用的UV檢測系統和可見光激發檢測系統兼容。
7. 對DNA泳動速度的影響小于常規的SYBR Green I。
半衰期長, 自然損耗低, 可多次使用, 使其相對使用成本比常規的SYBR Green I和其它非對稱花青類染料低
電泳中染色:將本產品按1:10000的比例加入到融化的瓊脂糖凝膠中制備凝膠,其余同常規操作,凝膠可以多次融化。
電泳后染色:將本產品按1:3000-1:4000的比例配制成染液,在塑料容器中 染色15-20分鐘,然后進行UV檢測。染色液可以在常溫下閉光長期保存,重復使用多次。
圖注:用本產品(1×)加入到瓊脂糖膠中并用微波爐融化五次、然后進行常規DNA 電泳,樣品DNA為100bp分子量對照(最大片段為600 bp,最小片段為100 bp)。樣品1-8中每條DNA帶的量分別為150、75、35.5、15.8、7.9、3.95、
1.97、1 ng。照片是在300 nm紫外透射儀下用長波綠色濾光片完成(如果使用254 nm紫外透射儀,效果會更好)
如何提高非對稱花青類染料(asymmetric cyanine stain)穩定性? A:SYBR Green I和SuperSYBR都屬于非對稱花青類染料。第一代花青類染料在
有氧存在時很容易發生光氧化反應,十分不穩定,需要保存在DMSO中。但是,可以通過下列方法提高其穩定性。一是在分子中引入鹵素或氰基等吸電基團來降低光氧化反應活性,二是插入環羥基團來增加分子的穩定性,三是使用各種添加劑。SuperSYBR就是通過這些改良得到的產品。