本產(chǎn)品是基于Feinberg和Vogelstein發(fā)明的隨機(jī)引物標(biāo)記法而開發(fā)出來的即用型DNA探針標(biāo)記試劑盒,標(biāo)記過程由雙鏈DNA熱變性、隨機(jī)引物與單鏈DNA結(jié)合、在Klenow DNA聚合酶催化下,引物的延伸合成DNA探針并摻入標(biāo)記的核苷酸三步組成,可用下面的示意圖表示
本產(chǎn)品在上述原理的基礎(chǔ)上本產(chǎn)品的特點(diǎn)是:
1. 使用十聚引物,復(fù)性效率比六聚引物更高。
2. 使用無外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶,已標(biāo)記DNA探針不會(huì)被酶降解。
3. 快速,最快1小時(shí)即可完成標(biāo)記反應(yīng)。
4. 所得DNA探針比活性高(對同位素可以達(dá)到109 cpm/ μg DNA),檢測靈敏度高。
5. 所需模板DNA量少(只需要10 ng以上即可),DNA可以是各種形狀(線狀和環(huán)狀)的、也可以是單鏈或雙鏈的,長度在100 bp以上均可。
6. 得到的探針長度在200-400 nt之間,可以用于Southern雜交、Northern雜交、原位雜交、菌落和斑點(diǎn)印跡雜交等。
7. 三種標(biāo)記選擇,其中90603A可用于各種同位素標(biāo)記和其他任何非同位素標(biāo)記,但需自備標(biāo)記底物;90603B和90603C可分別用于生物素和地高辛標(biāo)記。
使用及效果
將10ng-3 μg的DNA模板在水(終體積不超過14 μL)中變性5分鐘后放冰上, 加入2 μL 10×標(biāo)記緩沖液、1 μL Klenow exo-酶、1 μL 標(biāo)記核苷酸(A型中不提供),混合后37℃保溫1-20小時(shí),加入1 μL自備的0.5M EDTA終止反應(yīng)。所得標(biāo)記探針可以直接使用或者放-20℃長期保存。