phACE2-promoter-TA-luc (報告基因質粒)自行研發的用于檢測人血管緊張素轉化酶2 (Angiotensin converting enzyme2,ACE2)的promoter轉錄活性水平的報告基因質粒。
phACE2-promoter-TA-luc是以pGL6-TA質粒為模板,在其多克隆位點插入了human ACE2的啟動子序列(1970bp),可以高靈敏度地檢測human ACE2 promoter的激活水平。
ACE2是SARS冠狀病毒(SARS-CoV和SARS-CoV-2)和人類呼吸道冠狀病毒NL63的受體。SARS-CoV/SARS-CoV-2通過其Spike蛋白受體結合域(Receptor binding domain,RBD)與ACE2的肽酶結構域結合,參與病毒的感染過程。SARS-CoV-2 Spike蛋白與ACE2的親和力是SARS-CoV Spike蛋白與ACE2的親和力的10-20倍。
有報道干擾素(Interferon)可以上調ACE2的轉錄水平,從而可能促進相關病毒感染。
ACE2是腎素-血管緊張素系統(Rennin-angiotension system,RAS)的重要成員。血管緊張素(Angiotensin II,Ang II)是RAS系統的主要效應分子,具有促進內皮細胞凋亡和促進炎癥因子表達的作用。ACE2主要是通過降解血管緊張素II生成血管緊張素1-7(angiotensin-(1-7))從而發揮機體保護功能。ACE2是在肺、心臟、腎臟和腸中表達的I型膜蛋白,其胞外域包括N端肽酶結構域(Peptidase domain,PD)及C端Collectrin-like結構域(CLD)。
pGL6-TA是用于在哺乳動物細胞中進行螢火蟲螢光素酶(firefly luciferase)報告基因檢測的新一代質粒。該報告基因質粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改進,一方面對于luciferase的編碼進行了改進,確保能更好地在哺乳動物細胞中進行表達,同時對整個質粒中所有可以被預測出的可能的轉錄因子結合位點全部進行了適當的突變處理,在保持原有功能不變的情況下,使各種轉錄因子在質粒上的非特異性結合降到最低。
phACE2-promoter-TA-luc質粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
human ACE2 promoter | 20-1989 |
Minimal TA promoter (pTA) | 2002-2024 |
luc2 reporter gene | 2056-3718 |
SV40 late poly(A) signal | 3753-3974 |
SV40 early enhancer/promoter | 4022-4440 |
Synthetic neomycin phosphotransferase (Neor) coding region | 4465-5259 |
Synthetic poly(A) signal | 5284-5332 |
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region | 5399-5418 |
ColE1-derived plasmid replication origin | 5656 |
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region | 6447-7307 |
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site | 7412-7565 |
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region | 7514-7533 |
phACE2-promoter-TA-luc質粒(7565bp)的圖譜如下:
phACE2-promoter-TA-luc中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut phACE2-promoter-TA-luc)包括:
AatII | AclI | AflII | AscI | AsiSI | BglII | BmgBI |
BmtI | BsiWI | BspEI | BssHII | CspCI | EcoRV | MluI |
NdeI | NheI | NruI | PacI | PaeR7I | PflMI | PmeI |
PspXI | RsrII | SbfI | SmaI | SnaBI | SrfI | SwaI |
TspMI | XcmI | XhoI | XmaI | XmnI | ZraI |
phACE2-promoter-TA-luc中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut phACE2-promoter-TA-luc once)包括:
Acc65I | G`GTAC,C | 14 | Eco53kI | GAG|CTC | 780 |
AflIII | A`CRYG,T | 5598 | EcoNI | CCTNN`N,NNAGG | 4939 |
AhdI | GACNN,N`NNGTC | 6519 | HindIII | A`AGCT,T | 1900 |
ApaLI | G`TGCA,C | 5912 | KpnI | G,GTAC`C | 18 |
AseI | AT`TA,AT | 1545 | MfeI | C`AATT,G | 3892 |
BaeI | ,(N)5`(N)1ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5` | 4665 | NotI | GC`GGCC,GC | 6418 |
BamHI | G`GATC,C | 3985 | PciI | A`CATG,T | 5598 |
BciVI | GTATCC(N)5,N` | 5800 | PflFI | GACN`N,NGTC | 1390 |
BglI | GCCN,NNN`NGGC | 5 | PmlI | CAC|GTG | 920 |
BsaAI | YAC|GTR | 920 | PstI | C,TGCA`G | 6438 |
BsaI | GGTCTCN`NNNN, | 1189 | PvuI | CG,AT`CG | 6890 |
BsaXI | ,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` | 1147 | SacI | G,AGCT`C | 782 |
BsrGI | T`GTAC,A | 2556 | SacII | CC,GC`GG | 6914 |
BstBI | TT`CG,AA | 5334 | SalI | G`TCGA,C | 5348 |
BstEII | G`GTNAC,C | 6445 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 5 |
BstXI | CCAN,NNNN`NTGG | 6438 | SpeI | A`CTAG,T | 7349 |
BstZ17I | GTA|TAC | 7030 | StuI | AGG|CCT | 4418 |
Bsu36I | CC`TNA,GG | 6876 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 1390 |
DraIII | CAC,NNN`GTG | 3209 |
phACE2-promoter-TA-luc質粒中推薦使用的測序引物序列如下:
RVprimer3 (7514-7533):
CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC
phACE2-promoter-TA-luc的全序列信息:D2488 phACE2-promoter-TA-luc全序列.txt。
包裝清單:
產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
D2488-1µg | phACE2-promoter-TA-luc | 1μg |
D2488-100µg | phACE2-promoter-TA-luc | 100μg |
— | 說明書 | 1份 |
保存條件:
-20℃保存。
注意事項:
本質粒未經碧書面許可不得用于任何商業用途,也不得移交給訂貨人所在實驗室外的任何個人或單位。
本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明:
1.首次使用1µg包裝的本產品時,請先取少量本質粒轉化大腸桿菌,進行質粒小量、中量或大量抽提后再用于后續用途。抽提獲得的質粒可以通過酶切電泳進行鑒定,或通過測序進行鑒定。
2.100µg包裝的本產品質粒濃度為0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切或者轉染細胞。
3.以phACE2-promoter-TA-luc質粒用常規的細胞轉染方法轉染細胞。檢測時可以采用螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒(RG005/RG006)或雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒(RG027/RG028)。