產品縮寫：TGEV Ab
貨號：E513101
版本：2019.2
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豬傳染性胃腸炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
使用說明書
【產品名稱】
通用名：豬傳染性胃腸炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Transmissible Gastroenteritis Virus (ELISA)
【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【預期用途】 豬傳染性胃腸炎是由豬傳染性胃腸炎病毒（Transmissible Gastroenteritis Virus，TGEV）引起的豬的一種高度接觸
性消化道傳染病。以嘔吐、水樣腹瀉和脫水為特征。
本試劑盒用于檢測豬血清、血漿中豬傳染性胃腸炎病毒抗體，可用于豬傳染性胃腸炎病毒疫苗免疫效果評價。
【原
理】
本試劑盒由預包被豬傳染性胃腸炎病毒重組N蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯免疫法（ELISA）原理檢測
豬血清、血漿樣本中豬傳染性胃腸炎病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本，經溫育后若樣品中含有豬傳染性胃腸炎
病毒抗體，則將與酶標板上抗原結合，經洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結
合；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，與酶標結合物反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成
正相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬傳染性胃腸
炎病毒抗體。
【試劑盒組成】
序號
名稱
規格/96T×1
規格/96T×2
規格/96T×5
1
酶標記物
11ml×1(紅蓋)
11ml×2(紅蓋)
26ml×2(紅蓋)
2
樣品稀釋液
50ml×1(黃蓋)
50ml×1(黃蓋)
200ml×1(黃蓋)
3
20X 濃縮洗滌液
40ml×1(白蓋)
40ml×1(白蓋)
200ml×1(白蓋)
4
底物液 A
6ml×1(白蓋)
11ml×1(白蓋)
26ml×1(白蓋)
5
底物液 B
6ml×1(黑蓋)
11ml×1(棕蓋)
26ml×1(黑蓋)
6
終止液
6ml×1(黃蓋)
11ml×1(黃蓋)
26ml×1(黃蓋)
7
陽性對照
1.0 ml×1(紅蓋)
1.5 ml×1(紅蓋)
2.0 ml×1(紅蓋)
8
陰性對照
1.0 ml×1(綠蓋)
1.5 ml×1(綠蓋)
2.0 ml×1(綠蓋)
9
酶標板
96T×1
96T×2
96T×5
10
蓋板膜
1
2
5
11
自封袋
1
1
2
12
說明書
1
1
1
13
稀釋板
1
2
5
【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期 12 個月。
包被板開封后請于 2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為 2 個月。
【適用儀器】 含 450nm、630nm 波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品 1 周內可于 2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按 40 倍稀釋（如 5μl 血清加入 195μl 樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作 20 倍稀釋成工作洗滌液(如 19 份蒸餾水或去離子水+1
份濃縮洗滌液)。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫 30 分鐘，恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條，設空白對照 1 孔、陰性/陽性對照各 2 孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液 100μl；陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照 100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品 100μl。
4.混勻，蓋好蓋板膜，置 37℃（推薦水浴）避光反應 30 分鐘。
5.甩去孔內液體，每孔加 350 ul 工作洗滌液，靜置 30 秒后棄去，重復洗滌 5 次，最后一次拍干。
6.每孔加酶標記物 100μl（空白孔除外）。蓋好蓋板膜，置 37℃避光反應 30 分鐘。
7.洗滌，同步驟 5。
8.每孔依次加底物液 A、底物液 B 各 50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置 37℃避光反應 10 分鐘。產品縮寫：TGEV Ab
貨號：E513101
版本：2019.2
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9.每孔加終止液 50μl，混勻，于 450nm(可用 630nm 作參比波長）測定各孔吸光值（A 值），無參比波長用空白孔調零(即所有孔
吸光值減去空白孔吸光值)。
【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照≤0.10，陽性對照≥0.6。
【檢驗結果的解釋】
1.樣品的 OD 值即 ODS；
2.閾值計算：SP 值=（ODS-ODNC）/（ODPC-ODNC）；
SP 值≥0.2，結果判定為陽性；SP 值＜0.2，結果判定為陰性。
3.本實驗結果為陰性時表明豬只抗體水平不足，建議補打相應疫苗。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬傳染性胃腸炎病毒抗體，根據 A 值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以完全溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。
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