JM109化學克隆感受態(tài)細胞
目錄號：RTX301
儲存條件：-70℃凍存六個月
產(chǎn)品包裝：
| 貨號 | RTX301-04 |
| JM109 | 50×100ml |
| Competent cell Control Plasmid pUC18 (1 ng/μl) | 10μl |
產(chǎn)品簡介：
本公司生產(chǎn)的JM109感受態(tài)細胞采用經(jīng)特殊工藝處理得到，可用于DNA的化學轉化。使用pUC18質粒檢測，轉化效率可達108cfu/μg，-70℃保存幾個月轉化效率不發(fā)生改變。
JM109菌株介紹：
基因型：endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqI qZΔM15]
特點：用于藍白斑篩選；recA1和 endA1 的突變有利于克隆 DNA 的穩(wěn)定和高純度質粒DNA 的提取。
操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）
1取感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中，置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。應注意所用DNA體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。
以下實驗以100 μl感受態(tài)細胞為例。
2 向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（50 μl的感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），輕輕旋轉離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置45秒，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻2-3分鐘，該過程不要搖動離心管。
4 向每個離心管中加入500 μl 無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)45分鐘（150轉/分鐘），目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100 μl已轉化的感受態(tài)細胞加到含相應抗生素的SOB或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12—16小時。
注：涂布用量可根據(jù)具體實驗來調整。如轉化的DNA總量較多，可取更少量轉化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉化的DNA總量較少，可取200—300 μl轉化產(chǎn)物涂布平板。如果預計的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板）
注意事項：
1. 感受態(tài)細胞應保存在-70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免感受態(tài)細胞的轉化效率。
2. 進行轉化操作時，應根據(jù)相應溫度及無菌條件的要求進行。
3. 為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，將損失降到最低。
