抗氟離子酸性磷酸酶檢測試劑盒(Fluoride Resistant Acid Phosphatase Assay Kit)是一種用于快速、便捷地檢測細胞或組織樣品的裂解或勻漿產物的上清液、血漿、血清、尿液等樣品中內源性的抗氟離子酸性磷酸酯酶活性的試劑盒。

酸性磷酸酶(Acid Phosphatase)，也稱酸性磷酸酯酶，在酸性條件下可以催化磷酸酯鍵的水解。酸性磷酸酶是一個蛋白家
族，哺乳動物中其分子量從18kD到100kD不等。酸性磷酸酶主要分為兩類，一類為抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase, TRAP)，一類為抗氟離子酸性磷酸酶(fluoride resistant acid phosphatase, FRAP)。
抗氟離子酸性磷酸酶包括在絕大多數細胞的溶酶體中表達的溶酶體酸性磷酸酶、前列腺(prostate gland)、腦、肝臟、脾臟和血小板中表達的酸性磷酸酶。抗氟離子酸性磷酸酶在前列腺中的表達水平非常高，當前列腺發生癌變并出現轉移時抗氟離子的前列腺特異性酸性磷酸酶(prostatic acid phosphatase)活性水平最高。當前列腺發生病變時會導致血液中抗氟離子酸性磷酸酶活性顯著升高。同時，血液中檢測到抗氟離子酸性磷酸酶活性升高時，通常是前列腺發生病變。因此，血清或血漿中抗氟離子酸性磷酸酶活性水平的升高，常被用作前列腺癌等前列腺病變的指標。溶酶體儲存性疾病(lysosomal storage diseases)如Gaucher's
disease等，也會導致血液中抗氟離子酸性磷酸酶活性水平一定程度的升高。
本試劑盒可以檢測血漿、血清、尿液、細胞或組織樣品的裂解或勻漿產物的上清液或純化的酶樣品等中的抗氟離子酸性磷酸酶活性。
Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)是一種常用的磷酸酶顯色底物，在酸性條件下，可在酸性磷酸酶作用下生成
para-nitrophenol。para-nitrophenol (p-nitrophenol)在堿性條件下，呈黃色產物，可以在400-415nm檢測吸光度。產物黃色越深，說明酸性磷酸酶檢活性越高，反之則酶活性越低。據此通過比色分析就可以計算出酸性磷酸酶活性水平。在適量的氟離子存在的情況下進行酸性磷酸酶的活性檢測，檢測得到的酸性磷酸酶活性就是抗氟離子酸性磷酸酶活性。
包括標準品和空白對照，本試劑盒共可進行120個樣品的檢測。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存，一年有效。顯色底物和p-nitrophenol溶液需避光保存。
注意事項：
如果希望進行酶活性的絕對定量，進行酶反應時必須注意精確計時。此時推薦采用孵育30分鐘等較長的時間，以減小操作過程中的時間誤差。同時如果樣品中酶活性較高，則可以預先適當稀釋樣品。
樣品溶液中須避免出現各種酸性磷酸酶抑制劑。
一管顯色底物配制后需當日使用完畢，因此請注意適當多準備一些樣品一起檢測，以避免試劑盒浪費。
氟離子溶液和p-nitrophenol溶液對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。反應終止液有腐蝕性，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或腐蝕其他物品。
本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1. 試劑準備：將所有試劑取出，恢復至室溫使用。
a. 顯色底物溶液：取一管顯色底物，溶解于2.5ml的檢測緩沖液中，充分溶解和混勻，冰上放置。新鮮配制的顯色底物溶液需在6小時內使用。
b. 標準品工作液：取10μl p-nitrophenol溶液(10mM)，用檢測緩沖液稀釋至0.2ml，最終濃度為0.5mM。
2. 樣品準備：
a. 細胞或組織裂解液的準備：采用適當細胞或組織裂解液裂解細胞或組織，建議使用P0013J Western及IP細胞裂解液(無抑制劑)裂解相關樣品。如果有必要需進行適當勻漿，隨后離心取上清，用于抗氟離子酸性磷酸酶的檢測。注意：裂解液中不能含有磷酸酶抑制劑。樣品可以-80℃凍存，但需避免反復凍融。
b. 血漿、血清和尿液的準備：血漿和血清按照常規方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，但為了消除樣品本身顏色的干擾，需設置加了血漿或血清但不加底物的對照。尿液通常也可以直接用于測定。上述樣品可以-80℃凍存，但需避免反復凍融。
c. 樣品的稀釋：如果樣品中含有較高活性的抗氟離子酸性磷酸酯酶，可以使用原有的裂解液或PBS等進行稀釋，也可以采用試劑盒中的檢測緩沖液進行稀釋。如果使用試劑盒中提供的檢測緩沖液進行稀釋，需注意保留足夠的檢測緩沖液用于試劑盒的檢測過程。
3. 參考下表使用96孔板設置空白對照孔、標準品孔和樣品孔。標準品的用量分別為4、8、16、24、32和40微升，樣品通常可以直接加40微升。如果樣品中的抗氟離子酸性磷酸酯酶活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。樣品的檢測最好能設置平行孔或三復孔。

4. 用槍頭輕輕吹打混勻，也可借助搖床進行混勻。
5. 37℃孵育5-10分鐘。(說明：待測樣品中抗氟離子酸性磷酸酶活性較低時，可適當延長孵育時間至30分鐘)
6. 每孔加入160μl反應終止液終止反應。此時，標準品或有抗氟離子酸性磷酸酶活性的孔會呈現不同深淺的黃色。
7. 在405nm測定吸光度。如果不能測定405nm，也可以在400-415nm范圍內檢測吸光度。如果不能立即測定，可以在數小時內完成測定，所顯現的黃色在數小時內穩定。
8. 酸性磷酸酶活性單位的定義：在pH4.8，37℃條件下，每分鐘水解para-nitrophenyl phosphate顯色底物產生1微摩爾
p-nitrophenol所需的酸性磷酸酶的量定義為一個酶活力單位。
9. 根據酶活性定義，計算出樣品中的抗氟離子酸性磷酸酯酶活性。