胃蛋白酶原由胃底主細胞分泌,在PH 1.5-5.0條件下,被活化成胃蛋白酶,將蛋白質分解為胨,一部分被分解為酷氨酸、苯丙酸等氨基酸。胃液胃蛋白酶測定可用于鑒別神經性低酸癥和胃性低酸癥,當胃酸過少或缺乏時,前者胃蛋白酶的含量有時正常而后者鹽酸與胃蛋白酶同時缺乏。一般認為胃性低酸癥是由于胃粘膜的重癥器質性變化所致,研究具有重要的參考意義。胃癌、萎縮性胃炎、慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二脂腸炎、惡性貧血以及甲狀腺功能減退等胃蛋白酶的分泌常減少。一般胃酸基礎分泌高的,如十二脂腸潰瘍等,胃蛋白酶活性增高。
胃蛋白酶可水解蛋白產生含酚的氨基酸,而酚試劑可被含酚的氨基酸還原成藍色物質,通過比色可測定胃蛋白酶活力。
產品優點如下:
1、穩定性好:試劑盒2~8℃存放1個月有效。
2、再現性好:變異系數CV=1.7%。
3、回收試驗: X =104%。
4、受外界影響因素小:干擾因素少,重復性強。
5、測試范圍:可測動物胃液、組織等。
所需儀器及自備試劑:
1、分光光度計/酶標儀/半自動生化分析儀(比色測定波長為660nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)
3、臺式離心機
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理:
胃液: 先做預試,再根據活力大小進行取樣操作
動物組織樣本:可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液,離心取上清測定。
具體的樣本前處理:參考我們隨貨發送的《實驗方法學》以及試劑盒中詳細說明書。
操作流程:
1、按步驟加入樣本和R1、R2, 37℃準確水浴10分鐘
2、測定管加入R1, 37℃水浴10分鐘,3500轉/分離心10分鐘
3、取上清加R3、R4,37℃水浴20分鐘
4、660nm波長,1cm光徑,比色