注 意：正式測定前務必取 3 - 5 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
測定對象中各種抗氧化物質和抗氧化酶等構成總抗氧化水平。在生物學、醫學和藥學研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。
測定原理：
在酸性環境下，抗氧化物質還原 Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產生藍色的 Fe2+-TPTZ 的能力反映了總抗氧化能力。
自備實驗用品：
恒溫水浴鍋、低溫離心機、酶標儀、96 孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體 120mL×1 瓶，使用前預冷。
試劑一：液體 20 mL×1 瓶，避光保存。
試劑二：液體 2 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體 2 mL×1 瓶，避光保存
樣品的制備：
(1)血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品
血漿（制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 離心10min，取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定，也可以-80℃凍存（不宜超過30 d）后再測定。
(2)組織樣品
按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后離心 10min（10,000g離心力，4℃），取上清，置冰上待測。
(3)細胞樣品
按照細胞數量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；離心 10min（10,000g離心力，4℃），取上清，置冰上待測。
操作步驟：
1、 酶標儀預熱 30min，調節波長至 593nm。
2、 混合液：根據使用量，將試劑一、試劑二、試劑三按 10:1:1 的比例混合，現用現配，使用前 37℃ 預熱。
3、 操作表
| 試劑名稱（μL） | 測定管 | 空白管 （只做一管） |
| 樣品 | 10 |
|
| 提取液 |
| 10 |
| 混合液 | 190 | 190 |
| 充分混勻，反應 20min，于 96 孔板，測定 593nm 吸光值， △A= A 測定-A 空白 | ||
注意：若測定管吸光值大于 1.5 則需要用提取液稀釋（計算公式中乘以稀釋倍數）。
總抗氧化能力計算公式：
標準曲線：y = 1.2416x + 0.0134R2 = 0.9996
x:Trolox 濃度(μmol/mL) y:吸光值差值△A
單位定義:用從標準曲線上獲得的抗氧化劑 Trolox 的量來表示樣本的總抗氧化能力。
（1）按樣本質量計算
總抗氧化能力（μmol Trolox/g 鮮重）=（△A-0.0134）÷1.2416×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W)
=0.8054×（△A-0.0134）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計算
總抗氧化能力（μmol Trolox/mg prot）=（△A-0.0134）÷1.2416×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×Cpr)
=0.8054×（△A-0.0134）÷Cpr
（3）按細胞計算
總抗氧化能力（μmol Trolox/104cell）=（△A-0.0134）÷1.2416×V 樣÷（V 樣÷V 樣總×細胞數量（萬個））
= 0.8054×（△A-0.0134）÷ 細胞數量（萬個）
（4）按液體體積計算
總抗氧化能力（μmol Trolox/mL）=（△A-0.0134）÷1.2416
=0.8054×（△A-0.0134）
V 樣總：加入提取液體積，1 mL；
V 樣：反應中樣品體積，10μL；
W：樣品質量，g；
Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL
注意事項：
1.試劑二對人體有刺激性，請采取適當的防護措施。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴乳膠手套操作。
2.盡量避免使用在酸性條件下呈藍色或接近藍色的試劑，否則對本試劑盒的檢測結果產生干擾。
3.樣品中不宜添加Tween、Triton 和 NP-40 等去垢劑和DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反應的還原劑。
