注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
類黃酮是一類多苯化合物，屬于植物次生代謝物，對(duì)人體具有消炎，抗菌，降血脂，清除體內(nèi)羥自由基，預(yù)防癌癥等作用。
測(cè)定原理：
在堿性亞硝酸鹽溶液中，類黃酮與鋁離子形成在510nm處有特征吸收峰的紅色絡(luò)合物，測(cè)定樣品提取液在510nm處的吸光值，即可計(jì)算樣品類黃酮含量。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：60%乙醇，自備。
試劑一：液體2mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體2mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體20mL×1瓶，4℃保存。
類黃酮提取：
將樣本烘干至恒重，粉碎，過(guò)40目篩之后，稱取約0.02g，加入2mL提取液，60℃振蕩提取2h，10000g，25℃，離心10min，取上清待測(cè)。
測(cè)定操作表：
|
| 空白管 | 測(cè)定管 |
| 樣本待測(cè)液（µL） |
| 540 |
| 蒸餾水（µL） | 540 |
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| 試劑一（µL） | 30 | 30 |
| 混勻，25℃靜置6min | ||
| 試劑二（µL） | 30 | 30 |
| 混勻，25℃靜置5min | ||
| 試劑三（µL） | 400 | 400 |
| 混勻，25℃靜置15 min，測(cè)定510nm處吸光值。ΔA=A測(cè)定-A空白，空白管只要做一管。 | ||
類黃酮含量計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 5.02x+0.0007，R2 = 0.9996
類黃酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷5.02÷(W÷V樣總)
= 0.398×（ΔA -0.0007）÷W
V樣總：加入提取液體積，2mL； V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.54mL； W：樣品質(zhì)量，g
最低檢出限為10µg/g。
