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肌酸激酶(CK)測定試劑盒

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    意:注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心臟、肌肉以及腦等組織中,能可逆地催化肌酸與ATP之間的轉磷酰基反應,在能量運轉、肌肉收縮和ATP再生中有重要作用,是臨床診斷心腦疾病的一個重要指標。


測定原理

CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP與葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化6-磷酸葡萄糖與NADP+生成NADPH,導致340nm光吸收值增加。


自備實驗用品及儀器

天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計、1 mL石英比色皿和蒸餾水。


試劑組成和配制

提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:粉劑1瓶,4℃避光保存,使用前加15mL蒸餾水溶解。

試劑二:液體15mL×1瓶,4℃保存。

工作液:臨用前根據用量將試劑一和試劑二以1:1混合。使用前37℃溫育2min


粗酶液提取

1. 組織樣本:按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g4℃離心15min,取上清,置冰上待測。

2. 血清樣本:直接測定。


測定操作表

1. 紫外分光光度計預熱30min,調節波長至340nm,蒸餾水調零。

2.在1 mL石英比色皿中加入200μL樣本和300μL蒸餾水,最后加入500μL工作液,立即混勻,37℃下測定初始吸光值A11min后的吸光值A2ΔAA2-A1

 

CK活性計算公式

1、按組織蛋白含量計算

酶活定義:37℃pH7.0時,每毫克蛋白質1min內催化產生1nmol NADPH為一個酶活單位。

2、按組織樣本質量計算:

酶活定義:37℃pH7.0時,每克樣品1min內催化產生1nmol NADPH為一個酶活單位。

3. 按血清計算:

酶活定義:37℃pH7.0時,每升血清1min內催化產生1nmol NADPH為一個酶活單位。

NADPH摩爾消光系數,6220 L /mol/cmd:比色皿光徑,1cmV反總:反應體系總體積,1mLV樣:反應體系中樣本體積,0.2mLT,反應時間,1minCpr:樣本蛋白濃度,mg/mLW:樣本質量,g

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