ATP酶存在于組織細胞膜及細胞器膜上,是生物膜上的一種蛋白酶,它在物質運送、能量轉換以及信息傳遞方面具有重要的作用。
ATP酶可分解ATP生成ADP及無機磷,測定無機磷的量可判斷ATP酶活力的高低
產品優點如下:
1、快速簡便:全程約50分鐘,可測100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20l~50l即可測紅細胞膜中的ATP酶,只需5mg左右組織就可測組織勻漿中的ATP酶、0.2g組織可測線粒體及微粒體中的ATP酶。
3、穩定性好:試劑盒2~8℃存放6個月有效。
4、再現性好:變異系數CV=1.7%。
5、回收試驗: X =103.3%。
6、受外界影響因素小:干擾因素少,重復性強。
7、測試面廣:可測不需要高速離心的紅細胞膜以及不需要高速離心的組織勻漿中的ATPase。
所需儀器及自備試劑:
1、分光光度計/酶標儀/半自動生化分析儀(比色測定波長為660nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)
3、臺式離心機
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理:
紅細胞:需按照試劑盒中說明書上紅細胞的測定方法進行提取后測定。
動物組織樣本:可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液,離心取上清測定。
培養細胞、細菌、植物組織:常用PBS作為勻漿介質破碎后離心取上清測定。
具體的樣本前處理:參考我們隨貨發送的《實驗方法學》以及試劑盒中詳細說明書。
操作流程:
1、酶促反應:按步驟加入樣本和混合試劑,37℃浴溫10分鐘,加入R7,混勻, 3000~4000轉/分離心10分鐘
2、定磷:取上清200l,加入2 ml定磷劑 37℃水浴30分鐘
3、660nm波長,1cm光徑,比色