H+、K+-ATPase對胃酸的分泌及胃的消化功能具有重要的生理意義。70年代Forte等人首先在牛蛙胃粘膜上分離出一類能被K+專一激活而不被烏本苷抑制的ATPase,即H+、K+-ATPase。隨后Lee·J等人又證明了含有該酶的膜囊泡運動跨膜運輸質(zhì)子的作用,從而為胃酸分泌的機理奠定了分子學(xué)基礎(chǔ)。H+、K+-ATPase定位于胃粘膜壁細(xì)胞上,屬于第二類質(zhì)子泵,它通過自身的磷酸化(E1→E2)與去磷酸化(E2→E1)完成的H+/K+電中性跨膜離子轉(zhuǎn)運,不斷將壁細(xì)胞內(nèi)的質(zhì)子運輸?shù)侥ね庑惺姑谒岬墓δ堋?/span>
ATP酶可分解ATP生成ADP及無機磷,測定無機磷的量可判斷ATP酶活力的高低。
H+K+—ATP酶是一種能被鉀專一激活而不被烏本苷抑制的ATP酶。
產(chǎn)品優(yōu)點如下:
1、快速簡便:全程約50分鐘,可測100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取樣本量100ul。
3、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個月有效。
4、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
5、回收試驗: X =103.3%。
6、受外界影響因素小:干擾因素少,重復(fù)性強。
7、測試面廣:可測動物組織、紅細(xì)胞以及各種培養(yǎng)細(xì)胞、各種水產(chǎn)等,效果均佳。
所需儀器及自備試劑:
1、分光光度計/酶標(biāo)儀/半自動生化分析儀(比色測定波長為660nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃和45℃)
3、臺式離心機
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理:
紅細(xì)胞:需按照試劑盒中說明書上紅細(xì)胞的測定方法進行提取后測定。
動物組織樣本:可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液,離心取上清測定。
培養(yǎng)細(xì)胞:常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測定。
具體的樣本前處理:參考我們隨貨發(fā)送的《實驗方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說明書。
操作流程:
1、酶促反應(yīng):按說明操作加入樣本100l和混合試劑,37℃準(zhǔn)確反應(yīng)10分鐘
2、加R7,3500轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,取上清
3、定磷:取上清液加入定磷劑,45℃水浴5分鐘
4、660nm波長,1cm光徑,比色