- 介紹： 基 因 型F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) LAMpir U169 endA1 recA1 hsdR17(rk - ,mk +) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA簡(jiǎn) 要 說 明DH5α λpir 菌株來源于 DH5α，在 DH5α 大腸桿菌基因組中引入 LAMpir，即為 DH5α λpir，該菌株可以表達(dá) PIR 蛋白，使得含有 R6Kg ori 復(fù)制子的質(zhì)粒可以在其中正常復(fù)制。 DH5α λpir 菌株缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)，提高了質(zhì) 粒 DNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入 DNA 的穩(wěn)定性； lacZΔM15 的存在使 DH5α 可用于藍(lán)、白斑篩選；但 DH5α λpir 菌株生長(zhǎng)速度較慢，在平板培養(yǎng)或液體搖菌時(shí)應(yīng) 延長(zhǎng)生長(zhǎng)時(shí)間。生物開發(fā)的 DH5α λpir 感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>1×109 cfu/μg DNA。
- 操 作 說 明
- 1.DH5α λpir 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并 用手撥打 EP 管底混勻，冰中靜置 25 分鐘。
- 2.42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
- 3.向離心管中加入 700 μl 不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (LB)，混勻后 37℃，200 rpm 復(fù)蘇 70 分鐘。
- 4. 5000 rpm 離心 1 分鐘收集菌體，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的 LB 培養(yǎng)基上。
- 5. 將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱至少 18 小時(shí)。
- 注 意 事 項(xiàng)
- 1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中 8 分鐘內(nèi)加入目標(biāo) DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降 低轉(zhuǎn)化效率。
- 2. DH5α λpir 菌株生長(zhǎng)緩慢，在平板上培養(yǎng)或液體搖菌時(shí)應(yīng)延長(zhǎng)菌體生長(zhǎng)時(shí)間（37℃，18 小時(shí)以上）。
- 3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
- 儲(chǔ)存條件： -80℃
- 用途： 克隆感受態(tài)細(xì)胞
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