- 介紹： 基 因 型F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15Δ lacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG簡 要 說 明TOP10菌株來源于MC1061菌株， 是目前實驗室最常用的感受態細胞之一，基因型與DH10B高度類似（DH10B為galE15型，而TOP10為galU型）。TOP10生長速度快（比DH5α快，但比Mach1-T1生長速度慢），10小時可見克隆， recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。可用于構建克隆，藍白斑篩選等實驗，具有鏈霉素抗性。High5TM系列TOP10感受態細胞經特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率>108cfu/μg。
- 操 作 說 明
- 1.TOP10感受態細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態時迅速插入冰中），加入目 的DNA（質�；蜻B接產物）并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。
- 2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
- 3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
- 4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
- 5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少13h。
- 注 意 事 項
- 1.感受態細胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化，融化后8分鐘內加入質粒，否則會影響轉化效率。
- 2.混入質粒或連接產物時應輕柔操作。
- 3.轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。
- 儲存條件： -80℃
- 用途： 克隆感受態細胞
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