- 介紹： 基 因 型F- φ80 lacZ∆M15 ∆(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA supE44 λ-thi-1 gyrA96 relA1 tonA簡 要 說 明 JM330菌株(即DH5α T1 Phage Resistant)，來源于DH5α菌株。在DH5α大腸桿菌基因組中引入tonA，賦予其抗噬菌體T1,T5的能力，即為JM330。JM330菌株最大的特點是其可以在體內特異性降解甲基化質粒模板，廣泛應用于各種DNA定點突變試驗中。JM330菌株缺失核酸內切酶 (endA1)和重組酶(recA1)，提高了質粒DNA的產量和質量； lacZΔM15的存在使JM330可用于藍、白斑篩選。生物開發的JM330感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>1×109cfu/μg DNA。
- 操 作 說 明
- 1. JM330感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（例如：Dpn I消化產物等）并用手撥打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。
- 2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
- 3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇70分鐘。
- 4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養基上。
- 5. 將平板倒置放于37℃培養箱至少15小時。
- 注 意 事 項
- 1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
- 2. JM330可以對未被Dpn I降 解掉的質粒模板進行進一步的降解，因此可以保證定點突變具有更高的陽性率。
- 3. 轉化高濃度的質粒或Dpn I消化產物可相應減少最終用于涂板的菌量。
- 儲存條件： -80℃
- 用途： 克隆感受態細胞
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