- 介紹： 基 因 型endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (Strr)簡 要 說 明BJ5183是一種具有較高重組活力的大腸桿菌菌株，是目前腺病毒系統最常用的感受態細胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC雙重突變，賦予BJ5183細胞較強的重組能力，有利于轉入的目的基因與腺病毒質粒{pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]或pAdeasy-2[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3/E4 deleted)]}的重組。endA1（缺失核酸內切酶）的突變有利于重組DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。Strr 賦予BJ5183菌株鏈霉素抗性。BJ5183感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>5×108 cfu/μg DNA。
- 操 作 說 明
- 1.BJ5183感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質粒（含有目標基因并線性化）和腺病毒質粒，并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
- 2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
- 3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
- 4.5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
- 5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。
- 注 意 事 項
- 1.感受態細胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
- 2.混入目的DNA時應輕柔操作。
- 3.BJ5183菌株的質粒產量不高。腺病毒構建成功后，可選擇在其他大腸桿菌菌株中擴繁，純化質粒。
- 4.BJ5183感受態細胞對溫度敏感，應儲存在-80℃超低溫冰箱，避免溫度波動，溫度波動會降低感受態轉化效率。
- 儲存條件： -80℃
- 用途： 克隆感受態細胞
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