喹乙醇代謝物（MQCA）檢測試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)的藥物殘留檢測產(chǎn)品,與儀器分析技術(shù)比較，能經(jīng)濟(jì)、快速地檢測出雞肉中的喹乙醇代謝物。

• 規(guī) 格：96T/盒
• 檢測樣本：組織
• 檢測方法：酶聯(lián)免疫法
• 貯存條件：2～8℃
• 保 質(zhì) 期：12個(gè)月

•  1 原理及用途

  喹乙醇代謝物（MQCA）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測組織豬肝及血清樣本中的喹乙醇代謝物(methyl-3-quinoxaline-2-car-boxylic acid ，MQCA)，試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時(shí)，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的喹乙醇代謝物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗喹乙醇代謝物抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含喹乙醇代謝物含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中喹乙醇代謝物的殘留量。

  2 技術(shù)指標(biāo)

  2.1 試劑盒靈敏度：0.3ppb(ng/ml)

  2.2 反應(yīng)模式：25℃，30min～30min～15min

  2.3 檢測下限：

  組織………………………………………0.6ppb

  豬肝………………………………………1.2ppb

  血清、尿液………………………………1.5ppb

  2.4 交叉反應(yīng)率：

  喹乙醇代謝物（MQCA）…………………100%

  喹噁啉-2-羧酸（QCA）…………………＜1.0%

  喹乙醇……………………………………＜1.0%

  脫二氧喹乙醇……………………………＜1.0%

  喹烯酮……………………………………＜1.0%

  脫二氧喹烯酮……………………………＜1.0%

  乙酰甲喹…………………………………＜1.0% 

  2.5 樣本回收率：

  組織、尿液…………………………………85±25%

  豬肝、血清…………………………………80±25%

   

  3 試劑盒組成

  酶標(biāo)板……………………………96孔

  標(biāo)準(zhǔn)品：各1ml

  0ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb、24.3ppb

  高標(biāo)準(zhǔn)品（紅蓋）：100ppb…………1ml

  酶標(biāo)記物（紅蓋）……………………11ml

  抗體工作液（藍(lán)蓋）…………………6ml

  底物液A（白蓋）……………………6ml

  底物液B（黑蓋）……………………6ml

  終止液（黃蓋）………………………6ml

  20×濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml

  2×復(fù)溶液（黃蓋）…………………50ml

  說明書………………………………1份

  蓋板膜…………………………………1張

  自封袋…………………………………1個(gè)

  4 需要的器材和試劑

  4.1 儀器：酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）

  4.2 微量移液器：單道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl

  4.3 試劑：乙酸乙酯、濃硫酸、正己烷

  5 樣本前處理

  5.1 樣本處理前須知：

  實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

  5.2 配液：

  配液1：2M  H₂SO₄

      取濃硫酸 15ml緩慢加去離子水中混勻，定容至120ml，室溫保存。

  配液2：1×復(fù)溶液

  將2×復(fù)溶液用去離子水2倍稀釋（1份復(fù)溶液加1份去離子水），用于樣本的復(fù)溶，復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。

  配液3：工作洗滌液

  將濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)。

  5.3 樣本前處理步驟：

  5.3.1 組織（豬肉、雞肉、魚肉、蝦肉）樣本

  1）稱取1±0.05g去除脂肪的勻漿樣品，加入乙酸乙酯8ml，加入2M  H₂SO₄  1 ml，振蕩30秒，室溫4000r/min離心5min； 
  2）取上層乙酸乙酯4ml于潔凈玻璃試管中，于50-60℃氮?dú)饣蚩諝庀麓蹈桑?/font>

  3）用1ml正己烷溶解干燥物，震蕩30秒，再加入1×復(fù)溶液1ml，震蕩2min，室溫4000r/min離心5min；

  4）去除上層有機(jī)相，取下層液50ul用于分析。

      樣本稀釋倍數(shù)：2     檢測下限：0.6ppb

  5.3.2豬肝樣本

  1）稱取1±0.05g去除脂肪的勻漿樣品，加入乙酸乙酯8ml，加入2M  H₂SO₄  1 ml，振蕩30秒，室溫4000r/min離心5min；

  2）取上層乙酸乙酯2ml于潔凈玻璃試管中，于50-60℃氮?dú)饣蚩諝庀麓蹈桑?/font>

  3）用2ml正己烷溶解干燥物，震蕩30秒，再加入1×復(fù)溶液1ml，震蕩2min，室溫4000r/min離心5min；

  4）去除上層有機(jī)相，取下層液50ul用于分析。

  樣本稀釋倍數(shù)：4     檢測下限：1.2ppb

  5.3.3血清樣本

  1）取1ml血清(要求清亮且無溶血)加入1×復(fù)溶液4ml(即配液2) ，振蕩混勻2min；

  2）取混勻液50ul分析。

  樣本稀釋倍數(shù)：5    檢測下限：1.5ppb

  5.3.4尿液樣本

  1）取1ml清亮尿液(4000r/min離心10分鐘)加入1×復(fù)溶液4ml(即配液2) ，振蕩混勻2min；

  2）取混勻液50ul分析。

  樣本稀釋倍數(shù)：5    檢測下限：1.5ppb

  6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟

      將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上， 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

  6.1 編    號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

  6.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗體工作液50µl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光反應(yīng)30分鐘。

  6.3 洗    滌：小心揭開蓋板膜，甩去孔內(nèi)液體，每孔加350ul工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干（用吸水紙拍干，拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

  6.4 加酶反應(yīng)：加酶標(biāo)記物100µl/孔，25℃避光反應(yīng)30分鐘。

  6.5 洗    滌：同上

  6.6 顯    色：加底物液A 50µl/孔，再加底物液B 50µl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘（若藍(lán)色過淺，可適當(dāng)延長反應(yīng)時(shí)間）。

  6.7 終    止：加終止液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。

  6.8 測吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。

  7 結(jié)果分析

  7.1 百分吸光率的計(jì)算

  標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即

  百分吸光度值（%）＝	A	×100%
  	A0

  A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

  A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

  7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

      以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）的對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實(shí)際濃度。

      若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來電索取）

  8 注意事項(xiàng)

  8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

  8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

  8.3 混合要均勻，洗板要徹底，在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性。

  8.4 在所有孵育過程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。

  8.5 不要使用過了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。

  8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

  8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。

  9 貯藏及保存期

  儲(chǔ)藏條件：試劑盒于2-8℃保存，避免冷凍。

  保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見包裝盒。