本產品采用獨特的真菌裂解技術,能夠裂解包括孢子在內的各種真菌堅硬的外殼,同時結合硅膠膜離心吸附柱技術純化真菌DNA,通過氯仿抽提,有效去除蛋白等雜質污染,提取的DNA純度高,OD 260/280≈1.9,大小在30-50 kb之間,可直接用于各種PCR、酶切、Southern blot 等常規分子生物學實驗。本產品安全無毒,操作簡單,整個操作過程大約需要40 min。
產品信息:
產品信息:
組分 | 總量 | 備注 |
真菌裂解液 1(FLB1) | 50ml | 如有沉淀,65℃加熱溶解后使用 |
真菌裂解液 2(FLB2) | 50ml | 4℃保存 |
膜結合液(MB) | 50ml | |
通用漂洗液(WB) | 50ml | |
通用洗脫液(EB) | 10ml | |
離心吸附柱及收集管 | 50套 | 密閉干燥保存 |
使用方法
實驗準備: 自備的材料:液氮,氯仿,1.5 ml 滅菌離心管,研缽,渦旋振蕩器,臺式離心機,65℃水浴,冰浴。 操作步驟: 1、稱取0.1-0.5 g濕的真菌菌絲、孢子、子實體或0.1-3 ml液體培養物離心得到的沉淀,轉移到塑料研缽中,液氮研磨成粉 后轉移到新的1.5 ml離心管中。 注:1)盡量避免使用陶瓷或玻璃研缽,以免二氧化硅吸附 DNA影響得率。2)干燥菌絲或子實體等的使用量應比上述推薦量低 5-10倍。 2、向離心管中加入1 ml 65℃預熱的真菌裂解液1(FLB1),并用移液器充分吹打混勻。 3、65℃孵育5-30 min,其間吹打混勻2-3次。 4、室溫12,000 rpm離心3 min。 5、將不超過750 µl的上清液轉移到新離心管中。 注:上清液中偶有少量細小懸浮物,對后續操作無影響,無需特殊處理。 6、在上清液中加入等體積的真菌裂解液2(FLB2),上下顛倒30 s充分混勻,溶液將呈白色渾濁狀。 7、冰浴5-10 min。 8、室溫12,000 rpm離心3 min,轉移上清到新的1.5 ml 離心管中。 9、加入0.2 ml氯仿,劇烈振蕩30 s充分混勻。 10、室溫12,000 rpm離心3 min,小心轉移不超過600 µl的上清液到新的1.5 ml離心管中,注意避免觸及兩相交界面的白色 膜狀物。 11、加入1.5倍體積的膜結合液(MB),上下顛倒30 s混勻,分次轉移到離心吸附柱中。 12、每次轉移700-800 µl混合液后,室溫放置5-10 min。 13、室溫12,000 rpm離心1 min,棄除收集管中的廢液。 14、將剩余的樣品加到離心吸附柱式中,重復第12-14步的操作。 15、加入700 µl的通用漂洗液(WB),室溫12,000 rpm 離心1 min,棄除收集管中的廢液。 16、加入300 µl的通用漂洗液(WB),室溫12,000 rpm 離心30 s,棄除收集管中的廢液。 17、再次離心1 min去除殘留液體。 18、將離心吸附柱放置在一個新的1.5 ml離心管中,加入30-100 µl通用洗脫液(EB),室溫放置5 min。 19、離心1 min,收集真菌DNA溶液。 20、(可選步驟)重復洗脫一次,以獲得更多的DNA。 21、DNA溶液可立即使用,也可適量分裝后于-20℃長期保存。
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