茜素紅S染色是一種常用的染色方法,廣泛用于成骨細胞分化、骨細胞或組織病理生理的研究。
茜素紅S是一種蒽醌類衍生物,能和多種金屬離子螯合生成穩定的橙紅色或深紅色的復合物,是一種良好的金屬指示劑,也可作為吸光度法測定金屬離子的顯色劑,還可作為酸堿指示劑,或用于極譜法測定金屬離子。
針對不同樣品特點,全新推出一系列茜素紅S染色液產品,利用染色液酸堿性和濃度的區別,可以分別對細胞外基質鈣質沉積、細胞內鈣質沉積和成骨細胞礦化結節鈣質進行染色,方便您根據實際需求進行選購。
染色原理:
茜素紅S可與碳酸鈣或磷酸鈣中的鈣鹽螯合形成橙紅色復合物,常用于染色或定位組織中的鈣質沉積。其中酸性染色液適用于骨、軟骨等細胞外基質鈣質沉積染色;細胞內鈣質沉積量比較少,酸性染色液可能會使鈣質溶解,導致染色效果差甚至假陰性,因此一般采用堿性染色液,同時堿性染色液可以增加染色時間,從而獲得比較滿意的染色效果。
染色效果:
圖1. 茜素紅S染色液(2%, pH4.2)用于小鼠尾椎骨石蠟切片的染色效果圖。如圖所示,鈣鹽沉積處顯橙紅色。注:實際染色效果會因樣品及實驗條件的不同而存在差異,本圖僅供參考。
圖2. 茜素紅S染色液(0.2%, pH8.3)用于MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨細胞前體細胞)細胞誘導分化后的染色效果圖。如圖所示,鈣鹽沉積處顯紫紅色。注:實際染色效果會因樣品及實驗條件的不同而存在差異,本圖僅供參考。
圖3. 成骨細胞礦化結節染色試劑盒(茜素紅S法)用于MC3T3-E1細胞誘導分化后的染色效果圖。如圖所示,經本試劑盒染色后,MC3T3-E1細胞礦化結節鈣鹽沉積處顯橙紅色。實際染色效果會因樣品及實驗條件的不同而存在差異,本圖僅供參考。
茜素紅S染色液(0.2%, pH8.3) (0.2% Alizarin Red S Staining Solution, pH8.3)是一種方便快捷的用于檢測鈣鹽沉積的染色液,適用于細胞內鈣質沉積的染色。
鈣是動物體內含量最高的無機鹽,是構成骨骼和牙齒的主要礦物質成分,還參與肌肉收縮、神經傳導等眾多生理過程。正常狀態下,鈣不以固體狀態出現在骨骼和牙齒之外的組織中,但病理狀態下,鈣形成碳酸鈣、磷酸鈣等鈣鹽析出并沉著于組織內。
茜素紅S染色是一種常用的染色方法,廣泛用于成骨細胞分化、骨細胞或組織病理生理的研究。茜素紅S (Alizarin Red S, 簡稱ARS),別名茜素磺酸鈉、茜素胭脂紅,CAS號為130-22-3,分子式為C14H7NaO7S,分子量為342.25。茜素紅S是一種蒽醌類衍生物,能和多種金屬離子螯合生成穩定的橙紅色或深紅色的復合物,是一種良好的金屬指示劑,也可作為吸光度法測定金屬離子的顯色劑,還可作為酸堿指示劑,或用于極譜法測定金屬離子。在組織學和組織病理學中,由于茜素紅S可與碳酸鈣或磷酸鈣中的鈣鹽螯合形成橙紅色復合物,而常用于染色或定位組織中的鈣質沉積。
本產品中的茜素紅S濃度為0.2%,pH8.3,呈堿性,適用于細胞內鈣質沉積的染色,例如血管鈣化、骨骼肌的鈣化、其它異位鈣化的染色以及培養的細胞鈣質沉積的鑒定。細胞內鈣質沉積一般量比較少,酸性的染色液可能會使鈣質溶解,導致染色效果差甚至假陰性,所以一般采用堿性的染色液;而且堿性的染色液通常可以增加染色時間,以此獲得比較滿意的染色效果。針對不同樣品的特點,三種茜素紅S染色液,具體請參考下表選擇合適的染色液。
產品名稱 | 茜素紅S染色液(2%, pH4.2) | 茜素紅S染色液(0.2%, pH8.3) | 成骨細胞礦化結節染色液(茜素紅S法) |
產品編號 | C0138 | C0140 | C0148 |
產品屬性 | 酸性 | 堿性 | 酸性 |
產品濃度 | 2% | 0.2% | - |
染色效果 | 橙紅色 | 紫紅色-橙紅色 | 橙紅色 |
適用范圍 | 用于骨、軟骨等細胞外基質鈣質沉積的染色 | 細胞內鈣質沉積的染色 | 成骨細胞礦化結節中的鈣質染色 |
特點 | 可快速染色;具有較好的染色效果 | 堿性,不易使鈣質溶解;可通過增加染色時間增強染色效果 | 成骨細胞專用 |
本產品用于MC3T3-E1 (小鼠胚胎成骨細胞前體細胞)細胞誘導分化后的染色效果參考圖1。
圖1. 茜素紅S染色液(0.2%, pH8.3)用于MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨細胞前體細胞)細胞誘導分化后的染色效果圖。如圖所示,鈣鹽沉積處顯紫紅色。注:實際染色效果會因樣品及實驗條件的不同而存在差異,本圖僅供參考。
按照每個切片使用100µl染色液來計算,本產品100ml的包裝可以用于1000個切片的染色。
保存條件:
室溫避光保存,至少一年有效。
注意事項:
需用戶自備的試劑:乙醇、蒸餾水、二甲苯。
根據樣品的特點選擇相應的茜素紅S染色液,也可進行預實驗以選擇最佳的染色液。
本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明:
1.樣品處理:
a.對于石蠟切片:
石蠟切片的制備:按照常規方法進行取材、固定、洗滌、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、烘片等步驟制備石蠟切片。
二甲苯中脫蠟5-10分鐘。
換用新鮮的二甲苯,再脫蠟5-10分鐘。
無水乙醇5分鐘。
90%乙醇2分鐘。
80%乙醇2分鐘。
70%乙醇2分鐘。
b. 對于細胞:
用PBS洗三次。
95%乙醇固定10分鐘。
PBS洗三次。
2.茜素紅S染色:
a.對于石蠟切片:加入茜素紅S染色液浸染5-10分鐘,蒸餾水充分洗滌,常規水化透明封片,隨后即可在顯微鏡下觀察和拍照。
注:茜素紅S染色液的染色時間需根據樣品鈣鹽的含量來確定,染色過程中應隨時在顯微鏡下觀察,觀察到鈣鹽呈較深的橙紅色即可取出水洗。通常染色5分鐘即可,如染色時間過長,可能會出現彌散現象。
b.對于細胞:加入適量茜素紅S染色液,37℃烘箱孵育30分鐘,蒸餾水充分洗滌,隨后即可在顯微鏡下觀察和拍照。
3.蘇木素復染(選做):
根據實驗的具體需要,可以考慮選擇進行復染