細胞名稱	23132/87（人胃癌細胞）
別名	23132/87
生長特性	貼壁上皮細胞融合生長
傳代方法	1:2傳代
生長方式	不適用
培 養(yǎng) 基	RPMI1640+10%FBS
培養(yǎng)體系	溫度：37℃ ，     氣相：95%空氣 ，5%CO2
細胞背景	1987年從一位72歲的胃腺癌患者的原發(fā)腫瘤中建立
凍存條件	完全培養(yǎng)基50%+40%FBS+10%DMSO，液氮

物種：人類（智人）

組織：胃

疾病：胃腺癌

支原體：用環(huán)丙沙星（Ciprobay）消除污染，然后用DAPI、微生物培養(yǎng)、RNA雜交檢測呈陰性

免疫學：細胞角蛋白+，細胞角蛋白-7+，細胞角蛋白-8+，細胞角蛋白-17+，細胞角蛋白-18+，細胞角蛋白-19+，結蛋白-，內(nèi)皮細胞-，EpCAM+，GFAP-，神經(jīng)絲-，波形蛋白-；（最初的數(shù)據(jù)顯示陰性，我們發(fā)現(xiàn)細胞表達細胞角蛋白-7）

指紋圖譜：小衛(wèi)星標記的多重PCR顯示了一個獨特的DNA圖譜

物種：經(jīng)AST、MDH等IEF鑒定為人類

細胞遺傳學：具有12%多倍體的人類超四倍體核型-47（45-52）<2n>XY，+20，t（1；15）（p11；p11），t（6；12）（p21；q21），i（13q），t（13；14）（p10；q10）-與已發(fā)表的核型非常相似

病毒ELISA：逆轉錄酶陰性；PCR：EBV-、HBV-、HCV-、HHV-8-、HIV-1-、HIV-2-、HTLV-I/II-、MLV-、SMRV-

細胞收到后處理：

細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)淖詈棉k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松）

細胞培養(yǎng)步驟：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。