正式測定前務必取 2-3個預期差異較大的樣本做預測定
土壤纖維素酶(Solid-cellulase,S-CL)活性測定試劑盒測定意義:
S-CL主要來源于土壤微生物,S-CL催化農作物秸稈產生的葡萄糖是主要的碳源營養物質。
測定原理:
采用3.5-二硝基水楊酸法測定S-CL催化纖維素降解產生的還原糖的含量。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:甲苯 10mL×1 瓶,4℃保存;(自備)
試劑二:液體 15mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:液體 10mL×1 瓶,4℃保存;
加樣表和測定步驟:
| 對照管 | 測定管 |
風干土樣(g) | 0.25 | 0.25 |
試劑一(μL) | 125 | 125 |
| 煮沸15min(蓋緊) | 振蕩混勻,室溫放置15min |
試劑二(μL ) | 250 | 250 |
試劑三(μL ) | 1000 | 1000 |
蒸餾水(μL ) | 250 | 250 |
振蕩混勻,40℃水浴糖化1h 后,煮沸15min(蓋緊,防止水分散失),得糖化液 | ||
糖化液(μL) | 50 | 50 |
試劑四(μL) | 150 | 150 |
混勻, 沸水浴中煮沸顯色15min(蓋緊,防止水分散失),冷卻 | ||
蒸餾水(μL) | 1050 | 1050 |
混勻,550nm 處蒸餾水調零,測定吸光值A,計算ΔA=A測定管-A對照管 |
S-CL 活力計算:
標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.3356x - 0.012;x 為標準品濃度(mg/mL),y 為吸光值。
單位的定義:每天每 g 土樣中產生 1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
S-CL 活力(mg/d/g)=(ΔA+0.012) ÷0.3356×V 反總÷W÷T =465×(ΔA+0.012)
T:反應時間,1h=1/24d; V 反總:反應體系總體積:1.625mL;W:樣本質量,0.25g。