土壤脲酶（UE)測試盒微量法正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：
UE 能夠水解尿素，產生氨和碳酸。UE 活性與有機物質含量、全氮和速效氮含量呈正相關， 反應了氮素狀況。
測定原理：
利用靛酚藍比色法測定脲酶水解尿素產生的 NH3-N。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1 瓶，臨用前加入 9mL 蒸餾水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的試劑 4℃ 保存；
試劑二：液體 19mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三 A 液：液體×1 支，4℃保存；試劑三 B 液：液體×1 瓶，4℃保存；臨用前將 A 液倒入 B 液中混合，待用；用不完的試劑 4℃保存一周；
試劑四：液體 2mL×1 瓶，4℃保存；
樣本的前處理：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量
（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 578nm，蒸餾水調零。
2、酶促反應
| 試劑名稱 | 測定管 | 對照管 |
| 樣本（μL） | 20 | 20 |
| 試劑一（μL） | 90 |
|
| 蒸餾水（μL） |
| 90 |
| 試劑二（μL） | 190 | 190 |
混勻，放入 37℃水浴 1h 后，10000g 25℃離心 10min，取上清液。
2、將上清液稀釋 10 倍（取 0.1mL 上清液，加入 0.9mL 蒸餾水）。
3、測氨量（在微量石英比色皿或 96 孔板中加入下列試劑）
|
| 測定管 | 對照管 |
| 稀釋后的上清液（μL） | 80 | 80 |
| 試劑三（μL） | 15 | 15 |
| 試劑四（μL） | 15 | 15 |
充分混勻，室溫放置 20min
| 蒸餾水（μL） | 90 | 90 |
混勻，于 578nm 處，蒸餾水調零，讀吸光值 A，計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設一個對照管。
UE 活力計算
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.0915x +0.0373；x 為標準品濃度（μg/mL），y 為吸光值
A。
1、血清（漿）UE 活力的計算:
單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘產生 1μg NH3-N 定義為一個酶活力單位。
UE 活力（μg/min/mL）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反總÷V 樣÷T=27.32×(ΔA -0.0373)
單位的定義：每天每 g 土樣中產生 1μg NH3-N 定義為一個酶活力單位。
2、組織、細菌或細胞中 1μg NH3-N 活力的計算:
（1） 按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘產生 1μg NH3-N 定義為一個酶活力單位。
UE 活力（μg/min/mg prot）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反總÷(V 樣×Cpr)÷T =27.32×(ΔA
-0.0373) ÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織每分鐘產生 1μg NH3-N 定義為一個酶活力單位。
UE 活力（μg/min/ g 鮮重）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T =27.32×(ΔA
-0.0373) ÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘產生 1μg NH3-N 定義為一個酶活力單位。
UE 活力（μg/min/104 cell）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=0.0546×ΔA
10：稀釋倍數；T：反應時間，60min； V 反總：反應體系總體積：0.3mL；V 樣：加入反應體系中樣本體積，0.02mL；V 樣總：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；
W：樣本質量， g；500：細菌或細胞總數，500 萬。
b. 用 96 孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.04575x +0.0373；x 為標準品濃度（μg/mL），y 為吸光值
A。
1、血清（漿）UE 活力的計算:
單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘產生 1μg NH3-N 定義為一個酶活力單位。
UE 活力（μg/min/mL）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反總÷V 樣÷T=54.64×(ΔA -0.0373)
單位的定義：每天每 g 土樣中產生 1μg NH3-N 定義為一個酶活力單位。
2、組織、細菌或細胞中 1μg NH3-N 活力的計算:
（1） 按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘產生 1μg NH3-N 定義為一個酶活力單位。
UE 活力（μg/min/mg prot）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反總÷(V 樣×Cpr)÷T =54.64×(ΔA
-0.0373) ÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織每分鐘產生 1μg NH3-N 定義為一個酶活力單位。
UE 活力（ μg/min/g 鮮重） ＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T
=54.64×(ΔA -0.0373) ÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘產生 1μg NH3-N 定義為一個酶活力單位。
UE 活力（ μg/min/104 cell ） ＝ (ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)
÷T=0.1092×ΔA
10：稀釋倍數；T：反應時間，60min； V 反總：反應體系總體積：0.3mL；V 樣：加入反應體系中樣本體積，0.02mL；V 樣總：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；
W：樣本質量， g；500：細菌或細胞總數，500 萬。
