正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
S-POD 主要來源于土壤微生物,能夠氧化土壤有機(jī)物質(zhì)產(chǎn)生過氧化物,在腐殖質(zhì)的形成過
程中具有重要作用。
測定原理:
S-POD催化有機(jī)物質(zhì)氧化成醌,后者在430nm有特征光吸收。
自備用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、乙醚50mL(不允許快遞)、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:粉劑×1 瓶,臨用前加入 10mL 蒸餾水,用不完的試劑仍4℃保存;
試劑二:液體 2mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:乙醚 50mL×1 瓶,4℃保存;(自備)
測定步驟:
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至430nm,蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表
試劑名稱 | 測定管 |
風(fēng)干土樣(g) | 0.02 |
試劑一(μL) | 100 |
試劑二(μL) | 20 |
振蕩混勻,30℃恒溫培養(yǎng) 1 h | |
試劑三(μL) | 50 |
試劑四(μL) | 430 |
振蕩數(shù)次,25℃室溫靜置 30min,取 200μL 上層液于 430nm 處測定吸光值 A。
S-POD 活力計算
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y= 8.97x -0.003;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值 A。
單位的定義:每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 紫色沒食子素定義為一個酶活力單位。
S-POD 活力(mg/d/g 土樣)=(A+0.003) ÷8.97×V 反總÷W÷T=80×(A+0.003)
T:反應(yīng)時間,1h=1/24d; V 反總:反應(yīng)體系總體積 0.6mL;W:樣本質(zhì)量,0.02g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y=4.485x -0.003;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值 A。
單位的定義:每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 紫色沒食子素定義為一個酶活力單位。
S-POD 活力(mg/d/g 土樣)=(A+0.003) ÷4.485×V 反總÷W÷T=160×(A+0.003)