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土壤錳過氧化物酶 (Soil manganese peroxidase,S-Mnp)試劑盒

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 注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

土壤錳過氧化物酶 (Soil manganese peroxidase,S-Mnp)試劑盒測定意義

錳過氧化物酶(EC1.11.1.13)是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶,主要存在于擔子菌中,屬于木質素降解酶系,能有效的降解木質素及廢水和土壤中比較難降解的氯化物,疊氮化合物、DTT,多環芳烴等。

測定原理

錳過氧化物酶在 Mn2+存在的條件下,將愈創木酚氧化為四鄰甲氧基連酚,在465nm 有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器

天平、低溫離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、震蕩儀、甲苯。

試劑組成和配制

試劑一:液體 30mL×1 瓶,4℃保存。

試劑二:液體 5mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 10mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑四:液體 5mL×1 瓶,4℃保存。

測定操作

 

對照管

測定管

土樣(g

0.1

0.1

甲苯(μL

50

50

25℃,靜置 15min

試劑一(μL

700

600

試劑二(μL

 

100

試劑三(μL

200

200

試劑四(μL

100

100

充分混勻,于 37℃震蕩反應 10min,于 10000rpm,4℃離心 10min,取上清于 1mL 玻璃比色皿,測定 465nm 處吸光值,記為 A 對照管和A 測定管,△A=A 測定管- A 對照管

 

酶活計算公式

酶活性定義:每克土壤每分鐘氧化 1nmol 愈創木酚所需的酶量為一個酶活力單位。

S-MnP 活性(nmol/min/g=A÷ε÷d×V 反總÷W÷T= 8.3×△A÷W

ε:愈創木酚摩爾消光系數:12100L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V 反總:反應總體積,1mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,10min

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