植物總糖和還原糖檢測試劑盒(DNS 微板法)
產品簡介：
植物體內的碳素營養狀況以及農產品的品質形狀，常以糖含量作為重要指標，單糖和某些寡糖(如麥芽糖)含有游離的醛基或酮基，具有還原性，屬于還原糖；多糖和蔗糖等屬于非還原糖，可以利用非還原糖能被酸水解為單糖的特性通過測定水解后的單糖含量對總糖進行測定。
植物總糖和還原糖檢測試劑盒(DNS 微板法)檢測原理是還原糖在堿性加熱條件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內還原糖的量與棕紅色產物的顏色深淺程度呈一定比例關系，在 540nm 處用酶標儀測定棕紅色物質的吸光度，該吸光度值與還原糖含量呈線性關系，利用標準曲線計算樣品中的還原糖和總糖的含量。該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。
產品組成：
| 編號 名稱 | YC06981 00T | YC06983 00T | Storage |
| 試劑(A): Glu 標準(1mg/ml) | 1ml | 2ml | 4℃ |
| 試劑(B): DNS 檢測液 | 10ml | 30ml | 4℃ 避光 |
| 試劑(C): 顯色液(總糖使用) | 5ml | 10ml | RT 避光 |
| 使用說明書 | 1 份 | ||
自備材料：
1、蒸餾水
2、50ml 離心管、1ml 離心管
3、離心機
4、水浴鍋或恒溫箱
5、酶標儀、96 孔板
6、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液
操作步驟(僅供參考)：
1、還原糖的提取：
①稱取植物樣品 0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約 3ml 勻漿，轉移至燒杯或三角瓶中，用 12ml蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次，洗出液也轉移至該容器。
②50℃水浴 30min，并不時攪拌，以便還原糖徹底浸出。
③將沉淀和浸出液轉移至 50ml 離心管，4000g 離心 5min。
④留取上清液，向沉淀中加入 20ml 蒸餾水，混勻，再次 4000g 離心 5min。
⑤留取上清液，將 2 次獲得的上清液合并，用蒸餾水定容至 100ml(提取液)，混勻，作為還原糖待測液。
2、總糖的水解和提取：
①稱取植物樣品 0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約 3ml 勻漿，轉移至燒杯或三角瓶中，用 12m蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次，洗出液也轉移至該容器。
②向容器中加入 10ml 6M 鹽酸溶液，攪拌均勻，煮沸 30min，并不時攪拌。。
③取 2 滴滴加于載玻片上，滴加 1 滴顯色液(約 50ul)，檢查水解是否完全，如已經水解完全，則不顯示藍色。
④水解完畢后，冷卻至室溫，加入 6M 氫氧化鈉溶液，使溶液 pH 至 7.4，用蒸餾水定容至 100ml，混勻，4000g 離心 5min 或過濾。
⑤取上清或濾液 10ml，用蒸餾水定容至 100ml，成稀釋 10 倍的總糖水解液(提取液)，取 50ul 總糖水解液，測定其還原糖的含量。
3、稀釋葡萄糖標準：取干凈離心管或試管，按下表操作，依次獲得系列濃度的 Glu 標準。
| 加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| Glu 標準(1mg/ml) | 0.01 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 |
| 蒸餾水 | 0.04 | 0.03 | 0.02 | 0.01 | 0 |
| 標準葡萄糖濃度(mg/ml) | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
4、加樣：取 1ml 離心管，按照下表設置空白孔、標準孔、測定孔，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡，小心混勻；如果樣品中的糖濃度過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設置 2~3 平行孔，求平均值。
| 加入物(ul) | 空白孔 | 標準孔 | 測定孔 |
| 蒸餾水 | 50 | － | － |
| 系列 Glu 標準(1~5 號) | － | 50 | － |
| 提取液 | － | － | 50 |
| DNS 檢測液 | 100 | 100 | 100 |
| 沸水浴中準確煮沸 5min，取出，自來水冷卻至室溫。補加蒸餾水 250ul。 | |||
5、還原糖測定：混勻，依次抽取 300ul 轉移至相應 96 孔板中，以空白孔調零，測定 540nm處標準孔、測定孔的吸光度。
計算：以系列 Glu 標準(1~5 號)，即標準葡萄糖濃度(mg/ml)為橫坐標，以相應的吸光度為縱坐標，作圖得標準曲線，根據提取液的吸光度在標準曲線上查出相應的葡萄糖濃度。
還原糖的百分含量：
100g 樣品中還原糖含量(g)=(c×VT)/(m×1000)×100=(c×VT)/(m×10)總糖的百分含量：
100g 樣品中總糖含量(g)=(c×N×VT)/(m×1000)×100×0.9
=(c×N×VT)/(m×10)×0.9
式中：c=從標準曲線查的糖量(mg/ml) VT=提取液的總體積(ml)=100 m=植物樣品的質量(g)
N=總糖水解液的稀釋倍數=10
注意事項：
1、 上述低溫試劑避免反復凍融，以免失效或效率下降。
2、 待測樣品如不能及時測定，應置于 2~8℃保存，3 天內穩定。
3、 如果樣品還原糖濃度過高，應用蒸餾水稀釋后重測，結果乘以稀釋倍數。
4、 總糖計算公式在測定干擾雜質很少、還原糖含量相對總糖含量很少時使用，×0.9 是為了從測定出的總糖水解成單糖中，扣除水解時所消耗的水量。
5、 6M 鹽酸配制：一般市售的濃鹽酸為 11.6~12M，用蒸餾水或去離子水與濃鹽酸 1：1混合即配制成 6M，鹽酸溶于水會放熱，應小心操作，避免傷人。
6、 6M 氫氧化鈉配制：氫氧化鈉 24g 溶解于蒸餾水或去離子水，補至 100ml，氫氧化鈉溶于水會放熱，應小心操作，避免傷人。
有效期：12 個月有效。
附錄 1：標準曲線制作：按說明書操作，通過分光光度計對系列標準進行吸光度的測定，其數值及標準曲線如下(僅供參考)：
| 標準葡萄糖濃度(mg/ml) | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
| 吸光度 | 0.256 | 0.635 | 1.043 | 1.409 | 1.746 |
