注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
銅藍(lán)蛋白是血漿的含銅蛋白，有運(yùn)輸銅的功能，同時(shí)具有氧化酶的活性，是細(xì)胞外液重要的抗氧化劑。
測(cè)定原理：
銅藍(lán)蛋白催化3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺生成藍(lán)色產(chǎn)物，在645nm處有特征吸收峰，依此可得銅藍(lán)蛋白活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體15mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體20mL×1瓶，4℃避光保存。（使用前37℃預(yù)熱）
測(cè)定操作表：
1、 血清（漿）等液體樣本：直接檢測(cè)。
2、 動(dòng)植物組織樣本：稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水，進(jìn)行冰浴勻漿。10000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
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| 空白管 | 測(cè)定管 |
| 樣品（µL） | 100 | 100 |
| 試劑一（µL） | 300 | 300 |
| 試劑二（µL） | 200 |
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| 混勻，37℃預(yù)熱5min | ||
| 試劑三（µL） | 400 | 400 |
| 混勻，37℃反應(yīng)30min | ||
| 試劑二（µL） |
| 200 |
| 混勻，25℃放置5min，1 mL玻璃比色皿,空白管調(diào)零，測(cè)定OD645 | ||
計(jì)算公式：
1、 按體積計(jì)算
單位定義：37℃條件下，每分鐘每毫升樣品與底物作用吸光值升高0.01為一個(gè)酶活單位。
Cp活力（U/mL）×V反總÷V樣÷T=33.33×OD645
2、 按鮮重計(jì)算
單位定義：37℃條件下，每分鐘每克樣品與底物作用吸光值升高0.01為一個(gè)酶活單位。
Cp活力（U/g鮮重）=×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T=33.33×OD645÷W
3、 按蛋白濃度計(jì)算
單位定義：37℃條件下，每分鐘每毫克蛋白樣品與底物作用吸光值升高0.01為一個(gè)酶活單位。
Cp活力（U/mg prot）=×V反總÷（Cpr×V樣）÷T=33.33×OD645÷Cpr
V樣：0.1 mL；V反總：1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30min；V樣總：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)：
試劑二和試劑三有一定的毒性和刺激性，請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施。
