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腸出血性大腸桿菌(O157:H7)檢測試劑盒(熒光型)

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【用途】
 
本試劑盒用于腸出血性大腸桿菌(O157:H7)檢測。
 
【原理概述】:
 
腸出血性大腸桿菌(O157:H7)檢測試劑盒(熒光型)利用重組酶和單鏈結合蛋白等酶在39 ℃恒溫下進行核酸擴增;并利用核酸外切酶切割根據模版設計的特異性分子探針,使熒光監測設備能實現對目標片段擴增過程的實時監控。
 
【產品特點】:
 
腸出血性大腸桿菌(O157:H7)檢測試劑盒(熒光型)具有靈敏度高、特異性強、反應時間短(僅需20 mins)等優點,反應組分為干粉狀態,操作簡便,易于保存。
 
可適用于各種品牌的熒光定量PCR儀、恒溫熒光擴增儀器等熒光檢測設備。

【包裝規格】:

48反應/

【試劑盒成分】

組成

含量

R buffer

1.2 mL×2

B buffer

150μL×1

試劑

48

使用說明書

1

【儲存條件及有效期】

儲存條件:儲存溫度≤ -20 oC,避光保存,避免重壓、反復凍融;產品有效期:12個月。

【操作步驟】

1.試劑準備(在試劑準備區進行)

1.1取出包裝盒中的各組分(凍干粉除外),室溫放置,待其溫度平衡至室溫后,混勻后瞬時離心備用。

1.2根據待測樣本,陰性對照,陽性對照的數量裝備凍干粉,每個干粉反應管加入45 μL R buffer (注意:R buffer需完全融化混勻,否則會對實驗效果產生影響);

2樣本加樣(在樣本處理區進行)

2.1向反應管中加入2.5 μL核酸模板(正對照反應請加入試劑盒提供的2.5 μL正對照模板);

2.2每個反應管加入2.5 μL B buffer, 蓋好管蓋(對于多個反應,建議將B buffer加至反應管的蓋子內側);上下顛倒反應管8-10次充分混合,混勻后,將反應液甩(或快速離心)至管子底部,轉移至擴增區。

核酸擴增(在擴增區進行,請參照各儀器說明書進行設置)

3.1 將反應管放入熒光檢測設備中并記錄樣本放置順序。熒光檢測程序設置為:恒溫39 oC;每30 s采集一次FAM通道熒光值,共40個循環;反應時間20 mins。

注:如使用ABI系列PCR儀,請務必于passive referencequencher處均選擇“none”

【結果判讀】

1. 建議使用我公司推薦的恒溫熒光擴增儀(WL-1.

陽性判斷:有 “S”型擴增曲線,機器顯示結果為“+”

陰性判斷:無 “S”型擴增曲線,機器顯示結果為“-”

注:當受樣本顏色或其他因素影響,顯示結果為“+”但并無 “S”型擴增曲線時,結果依然判定為陰性。

2. 使用熒光定量PCR設備時請在確定擴增過程中有類似“S”型擴增曲線時,結合以下原則進行判讀,若無則判定為陰性:

序號

通道

Ct

結果判斷

1

FAM

UNDET40

樣本低于檢測限,報告為陰性

2

FAM

≤37

報告為陽性

3

FAM

37-40

復檢一次,如仍為37-40,則報告為陰性

【注意事項】

1.  由于試劑盒靈敏度非常高,在進行反應時請注意避免微量待擴增DNA的污染,并盡量考慮設置空白對照以確認是否有待擴增DNA的污染。為了防止污染,實驗需要分區操作。

2.  實驗過程中穿戴工作服和一次性手套,操作中產生的所有廢棄物及時處理。

3.  試劑盒保質期12個月。每次使用時,請取出實驗所需的反應單元的數量,置于冰浴條下并在8小時內使用;剩余部分,請置于存儲條件下。

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