【包裝規格】:
48反應/盒
【試劑盒成分】:
組成 | 含量 |
R buffer | 1.2 mL×2管 |
B buffer | 150μL×1管 |
試劑 | 48份 |
使用說明書 | 1份 |
【儲存條件及有效期】:
儲存條件:儲存溫度≤ -20 oC,避光保存,避免重壓、反復凍融;產品有效期:12個月。
【操作步驟】:
1.試劑準備(在試劑準備區進行)
1.1取出包裝盒中的各組分(凍干粉除外),室溫放置,待其溫度平衡至室溫后,混勻后瞬時離心備用。
1.2根據待測樣本,陰性對照,陽性對照的數量裝備凍干粉,每個干粉反應管加入45 μL R buffer (注意:R buffer需完全融化混勻,否則會對實驗效果產生影響);
2樣本加樣(在樣本處理區進行)
2.1向反應管中加入2.5 μL核酸模板(正對照反應請加入試劑盒提供的2.5 μL正對照模板);
2.2每個反應管加入2.5 μL B buffer, 蓋好管蓋(對于多個反應,建議將B buffer加至反應管的蓋子內側);上下顛倒反應管8-10次充分混合,混勻后,將反應液甩(或快速離心)至管子底部,轉移至擴增區。
3 核酸擴增(在擴增區進行,請參照各儀器說明書進行設置)
3.1 將反應管放入熒光檢測設備中并記錄樣本放置順序。熒光檢測程序設置為:恒溫39 oC;每30 s采集一次FAM通道熒光值,共40個循環;反應時間20 mins。
注:如使用ABI系列PCR儀,請務必于passive reference和quencher處均選擇“none”。
【結果判讀】:
1. 建議使用我公司推薦的恒溫熒光擴增儀(WL-1).
陽性判斷:有 “S”型擴增曲線,機器顯示結果為“+”;
陰性判斷:無 “S”型擴增曲線,機器顯示結果為“-”;
注:當受樣本顏色或其他因素影響,顯示結果為“+”但并無 “S”型擴增曲線時,結果依然判定為陰性。
2. 使用熒光定量PCR設備時請在確定擴增過程中有類似“S”型擴增曲線時,結合以下原則進行判讀,若無則判定為陰性:
序號 | 通道 | Ct值 | 結果判斷 |
1 | FAM | UNDET或40 | 樣本低于檢測限,報告為陰性 |
2 | FAM | ≤37 | 報告為陽性 |
3 | FAM | 37-40 | 復檢一次,如仍為37-40,則報告為陰性 |
【注意事項】:
1. 由于試劑盒靈敏度非常高,在進行反應時請注意避免微量待擴增DNA的污染,并盡量考慮設置空白對照以確認是否有待擴增DNA的污染。為了防止污染,實驗需要分區操作。
2. 實驗過程中穿戴工作服和一次性手套,操作中產生的所有廢棄物及時處理。
3. 試劑盒保質期12個月。每次使用時,請取出實驗所需的反應單元的數量,置于冰浴條下并在8小時內使用;剩余部分,請置于存儲條件下。