【用途】
【包裝規格】：
48反應/盒
【試劑盒成分】：
| 組成 | 含量 |
| R buffer | 1.2 mL×2管 |
| B buffer | 150μL×1管 |
| 試劑 | 48份 |
| 使用說明書 | 1份 |
【儲存條件及有效期】：
儲存條件：儲存溫度≤ -20 oC，避光保存，避免重壓、反復凍融；產品有效期：12個月。
【操作步驟】：
1.試劑準備（在試劑準備區進行）
1.1取出包裝盒中的各組分(凍干粉除外)，室溫放置，待其溫度平衡至室溫后，混勻后瞬時離心備用。
1.2根據待測樣本，陰性對照，陽性對照的數量裝備凍干粉，每個干粉反應管加入45 μL R buffer （注意：R buffer需完全融化混勻，否則會對實驗效果產生影響）；
2樣本加樣（在樣本處理區進行）
2.1向反應管中加入2.5 μL核酸模板（正對照反應請加入試劑盒提供的2.5 μL正對照模板）；
2.2每個反應管加入2.5 μL B buffer, 蓋好管蓋（對于多個反應，建議將B buffer加至反應管的蓋子內側）；上下顛倒反應管8-10次充分混合，混勻后，將反應液甩（或快速離心）至管子底部，轉移至擴增區。
3 核酸擴增（在擴增區進行，請參照各儀器說明書進行設置）
3.1 將反應管放入熒光檢測設備中并記錄樣本放置順序。熒光檢測程序設置為：恒溫39 oC；每30 s采集一次FAM通道熒光值，共40個循環；反應時間20 mins。
注：如使用ABI系列PCR儀，請務必于passive reference和quencher處均選擇“none”。
【結果判讀】：
1. 建議使用我公司推薦的恒溫熒光擴增儀（WL-1）.
陽性判斷：有 “S”型擴增曲線，機器顯示結果為“+”；
陰性判斷：無 “S”型擴增曲線，機器顯示結果為“-”；
注：當受樣本顏色或其他因素影響，機器顯示結果為“+”但并無 “S”型擴增曲線時，結果判定依舊為陰性。
2. 使用熒光定量PCR設備時請在確定擴增過程中有類似“S”型擴增曲線時，結合以下原則進行判讀，若無則判定為陰性：
| 序號 | 通道 | Ct值 | 結果判斷 |
| 1 | FAM | UNDET或40 | 樣本低于檢測限，報告為陰性 |
| 2 | FAM | ≤37 | 報告為陽性 |
| 3 | FAM | 37-40 | 復檢一次，如仍為37-40，則報告為陰性 |
注：使用推薦儀器效果最佳。
【注意事項】：
1. 由于試劑盒靈敏度非常高，在進行反應時請注意避免微量待擴增DNA的污染，并盡量考慮設置空白對照以確認是否有待擴增DNA的污染。為了防止污染，實驗需要分區操作。一區：檢測制備區；二區，樣本制備區；三區，擴增及產物分析區（分區之間最好進行物理性隔離，避免人為因素造成的污染，各分區的器材請獨立使用）。
2. 實驗過程中穿戴工作服和一次性手套，試驗操作中產生的所有廢棄物及時處理。
3. 試劑盒保質期12個月。每次使用時，請取出實驗所需的反應單元的數量，置于冰浴條下并在8小時內使用；剩余部分，請置于存儲條件下。
