產品簡介：

Ø Hot-Start Taq DNA Polymerase是一種僅當溫度高于45ºC時才具有DNA聚合酶活性的Taq DNA Polymerase(簡稱Taq酶)與其可逆抑制劑的混合物，俗稱熱啟動Taq酶或HS Taq酶。使用本產品進行PCR反應時可以在室溫操作，并能有效避免室溫操作時由于普通Taq酶或其它耐熱DNA聚合酶存在活性而導致的非特異性PCR背景。

Ø Hot-Start Taq DNA Polymerase是Taq酶與其可逆性抑制劑的混合物。該抑制劑可以可逆性地結合于Taq酶活性位點，當溫度低于45ºC時，形成非活性的Taq酶和抑制劑的復合物，從而抑制Taq酶的活性。在常規PCR反應過程中，當溫度升高至45ºC或以上時，Taq酶和其可逆性抑制劑解離，從而發揮其正常的DNA聚合酶活性。上述機制使Hot-Start Taq DNA Polymerase僅在加熱到45ºC或以上時才會有酶活性，從而確保了小于45ºC時不會發生非特異性的DNA聚合反應，有效降低了PCR的非特異性背景，提高了PCR反應的準確性和精確性。

Ø 常規的DNA分離純化操作，例如PCR純化試劑盒或DNA凝膠回收試劑盒和乙醇沉淀等操作，都能有效去除本產品中的抑制劑，以避免可能的對于后續反應的干擾。

Ø Hot-Start Taq DNA Polymerase使用時無需額外的高溫孵育步驟以釋放Taq酶活性。

Ø Hot-Start Taq DNA Polymerase和普通的Taq DNA Polymerase一樣，可以催化5'至3'方向的依賴于DNA模板的DNA的聚合反應，沒有3'至5'的外切酶活性，最終會導致PCR產物的3'末端產生3'-dA overhangs，即產生帶一個A的3'粘端，可直接用于TA 克隆。

Ø 來源：本產品使用的Taq DNA polymerase為recombinant Taq DNA Polymerase，通過大腸桿菌表達純化獲得，和純化獲得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性質相同。

Ø 用途：高背景和有非特異性條帶的PCR，高專一性PCR(high-specificity PCR)，高靈敏度PCR，生物芯片分析(microarray analysis)，常規PCR，克隆PCR、TA克隆等，不建議用于熒光定量PCR (qPCR)。

Ø 活性定義：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 70ºC. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 67 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25ºC), 6.7 mM MgCl2, 1 mM 2-mercaptoethanol, 50 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml 

Ø 純度：不含DNA內切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，滿足常規PCR反應要求。

Ø 酶儲存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。

Ø 10X Hot-Start PCR Buffer：100 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25ºC), 500 mM KCl, 15mM MgCl2, 0.8% (v/v) Nonidet P40。

Ø 失活或抑制：酚氯仿抽提可以使Hot-Start Taq DNA Polymerase失活，加入脫氧膽酸鈉至0.06%，SDS至0.01%，或sarkosyl至0.02%均可以抑制Hot-Start Taq DNA Polymerase。

Ø 本產品用于50微升的PCR反應體系，足夠用于800個反應；用于20微升的PCR反應體系，足夠用于2000個反應。

保存條件：-20ºC保存。

注意事項：

Ø 由于PCR反應非常靈敏可以擴增目的基因序列超過1000萬倍，在使用Hot-Start Taq Polymerase時請注意避免微量待擴增DNA的污染，并盡量考慮設置不加模板的空白對照以確認是否有待擴增DNA的污染。

Ø Hot-Start Taq DNA polymerase在PCR過程中每循環的出錯幾率約為2.2×10-5，對于大于1kb的DNA片段的克隆推薦使用出錯幾率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA polymerase、BeyoTaq DNA polymerase等。對于普通的PCR或RT-PCR定性檢測或定量檢測，Hot-Start Taq DNA polymerase是最佳選擇。

Ø 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

Ø 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：

1. PCR反應體系的設置：

a. 融解并混勻PCR反應所需的各種溶液。將Hot-Start Taq DNA Polymerase置于冰浴上或冰盒內。

b. 參考下表在冰浴上設置PCR反應體系(如果有多個類似的PCR反應，可以先配制大體積的包含水、buffer、dNTP和Hot-Start Taq酶的混合物，然后分裝到各PCR反應管內。根據情況，有時混合物中可以包括引物)：

注意：

a.通常引物的終濃度為0.2μM時可獲得良好的檢測效果，也可以根據情況在0.1-1.0μM范圍內調整引物的終濃度。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發生非特異性反應時，可

 降低引物濃度。

b.對不同類型的模板在50µl反應體積中推薦用量如下：哺乳動物基因組DNA：0.1-1µg；大腸桿菌基因組DNA：10-100ng；質粒DNA：0.1-10ng。過多的模板DNA容易導致非特異性PCR產物

c. 用移液器輕輕吹打混勻或輕微Vortex混勻，室溫離心數秒，使液體積聚于管底。

d. 如果所使用的PCR儀有熱蓋則省略本步驟。如果PCR儀沒有熱蓋，則在管內滴入一滴礦物油(mineral oil，ST275)。

e. 把設置好的PCR反應體系置于PCR儀上，開始PCR反應。

2. PCR反應參數的設置可以參考如下示例：

STEP1(起始變性): 94ºC 3min

STEP2(變性): 94ºC 30sec STEP3(退火): 55ºC 30sec STEP4(延伸): 72ºC 1min

STEP5(循環): Go To STEP2 for 30 cycles STEP6(最終延伸): 72ºC 10min

STEP7(臨時保存): 4ºC forever

注意：

a. PCR反應的設置需根據模板、引物、PCR產物的長度和GC含量等條件的不同設定不同的PCR反應條件包括溫度、時間和循環數等。

b. STEP4(延伸)的時間設置需根據PCR產物的長度進行設置，通常每kb產物的延伸時間為1分鐘。例如PCR產物的長度為 1kb，則延伸時間可以設置為1分鐘，PCR產物的長度為2kb，則延伸

時間可以設置為2分鐘，以此類推。

c. 對于初次進行的PCR，為盡量確保可以擴增出預期的PCR產物，可以把循環數設置為35。對于需進行半定量反應循環數一定要進行適當優化，使PCR反應沒有達到平臺期。