一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
超氧陰離子自由基作為生物體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交聯(lián)或者斷裂，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞， 與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系，清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。生物體內(nèi)的分子氧可以經(jīng)過(guò)單電子還原轉(zhuǎn)變?yōu)槌蹶庪x子自由基(O2-)，O2-既可以直接作用于蛋白質(zhì)和核酸等大分子，也可以衍生為羥自由基、單線態(tài)氧、過(guò)氧化氫及脂質(zhì)過(guò)氧物自由基等對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能具有破壞作用的活性氧。
雅吉生物超氧陰離子自由基檢測(cè)試劑盒(磺胺微板法)又稱超氧陰離子產(chǎn)生速率檢測(cè)試劑盒，其檢測(cè)原理是在酸性條件下，2 份O2-與羥胺反應(yīng)生成 1 份 NO2-，NO2-在對(duì)氨基苯磺酸和萘胺的作用下反應(yīng)生成粉紅色的偶氮物質(zhì)，以酶標(biāo)儀測(cè)定 530nm 處吸光度，在一定范圍內(nèi)顏色深淺與 O2-成正比，根據(jù) A530 及 NO2-和 O2-的相關(guān)反應(yīng)中物質(zhì)的量的關(guān)系，可算出樣品中O2-的濃度。該試劑盒主要用于測(cè)定植物組織中的超氧陰離子自由基含量或超氧陰離子的產(chǎn)生速率及清除能力。
該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不用于臨床診斷或其他用途。
二、產(chǎn)品組成：
| 名稱規(guī)格 | 50T | 存儲(chǔ) |
| 試劑(A): NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM) | 1ml | 4℃ |
| 試劑(B): O2- Lysis buffer | 125ml | 4℃ |
| 試劑(C): 羥胺溶液 | 30ml | 4℃ |
| 試劑(D): 氨基苯磺酸顯色液 | 30ml | 4℃ 避 光 |
| 試劑(E): 萘胺顯色液 | 30ml | 4℃ 避 光 |
| 使用說(shuō)明書 | 一份 | |
三、自備材料：
1、蒸餾水
2、實(shí)驗(yàn)材料：植物組織(大豆、綠豆、玉米等葉片)、血液、組織樣本等
3、研缽或勻漿器
4、離心管或試管
5、低溫離心機(jī)
6、恒溫箱或水浴鍋
7、分光光度計(jì)，比色杯
四、操作步驟(僅供參考)：
1、準(zhǔn)備樣品：
①植物樣品：取正常的新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取 1~1.5g， 加入 2ml 預(yù)冷的O2- Lysis buffer 后冰浴條件下勻漿或研磨，4℃ 10000g 離心10min，上清液即為超氧陰離子自由基提取液，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>
②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測(cè)定，4℃保存，用于超氧陰離子自由基的檢測(cè)。
③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的超氧陰離子自由基，可以使用 O2- Lysis buffer 進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>
2、配制系列 NO2-標(biāo)準(zhǔn)溶液：取出 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM)恢復(fù)至室溫后，以 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM) 按下表繼續(xù)稀釋：
| 加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM) | 0.01 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 | 0.06 |
| 蒸餾水 | 0.99 | 0.98 | 0.97 | 0.96 | 0.95 | 0.94 |
| NO2-含量(μM) | 10 | 20 | 30 | 40 | 50 | 60 |
3、O2-加樣：按照下表設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的超氧陰離子自由基濃度過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置平行孔。
| 加入物(ml) | 空白孔 | 標(biāo)準(zhǔn)孔 | 測(cè)定孔 |
| 蒸餾水 | 1 | — | — |
| 系列 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1~6 號(hào)) | — | 1 | — |
| 待測(cè)樣品 | — | — | 0.25 |
| O2- Lysis buffer | — | — | 0.25 |
| 羥胺溶液 | — | — | 0.5 |
| 混勻，25℃水浴孵育 20min。 | |||
| 氨基苯磺酸顯色液 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 萘胺顯色液 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 混勻，30℃水浴孵育 30min。 | |||
4、O2-測(cè)定：以空白調(diào)零，比色杯光徑1cm、分光光度計(jì)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管530nm 處吸光度(即為A標(biāo)準(zhǔn)、A測(cè)定)。
