動物組織RNA穩定保存液(RNALater™ RNA Stabilization Reagent for Animal Tissue),簡稱試劑或,是一種用于采集動物組織時,僅需室溫操作,即可迅速抑制RNase并穩定保存組織樣品中RNA的無毒無害液態試劑。本產品廣泛用于新鮮動物組織樣品或細胞樣品中RNA的穩定與保存。
本產品使用范圍廣。本產品能夠用于各種動物組織樣品中RNA的穩定和保存,如肝臟、腦、肺、脾臟、腎臟、心臟、肌肉、骨組織等,也可用于培養細胞、真菌、細菌、血液以及某些植物樣品的保存。
本產品的效果和液氮凍存的效果一致。本產品可以迅速滲透到組織內部,完全抑制RNase,避免RNA降解,保持組織RNA的完整性,從而完美保存組織中的基因表達譜,并且和液氮一樣可以長期保存樣品中的RNA。
本產品安全便捷。本產品無任何毒性和刺激性,可室溫使用,確保了使用時的安全和便捷。和使用液氮相比,可以有效避免因使用超低溫的液氮而引起的凍傷、離心管爆裂等安全隱患,并且攜帶、運輸非常方便。
本產品適用于普通新鮮組織或細胞樣品中RNA的穩定和保存,更加適合樣品收集后不能夠立即進行RNA抽提(包括miRNA等小RNA)的情況,特別適用于野外或臨床采集的樣品、大批量采集的動物組織樣品和不能立即凍存樣品的RNA穩定與保存。
在本產品中樣品的保存時間和存儲溫度相關,例如37℃可保存1-2天,室溫可保存一周,4℃可以保存1個月,-20℃或更低溫度可以長期保存。具體如下表所示:
存儲溫度 | 37℃ | 25℃ | 4℃ | -20℃ | -80℃ |
保存時間 | 1-2天 | 1周 | 1個月 | 3-5年 | 5年 |
使用本產品在-20℃或-80℃凍存的樣品,反復凍融3-5次不會顯著影響RNA的質量。通常情況下,推薦把本產品保存的樣品在室溫或4℃運輸或短期存放,-20℃或-80℃長期存放。如果希望-20℃或-80℃長期存放,必須先4℃存放過夜或更長時間后,才能轉移到更低溫度存放。
本產品對于小鼠組織和HeLa細胞樣品的保存效果如圖1所示。組織和細胞用RNALater™分別在4℃保存1個月、室溫保存1周以及37℃保存1天后,抽提獲得的RNA與新鮮樣品一樣均能夠保持完整性;而用PBS在37℃保存1天后,大部分RNA都已經被降解。
圖1. RNALater™對于小鼠組織和HeLa細胞中RNA的穩定保存效果。按照圖中相應條件保存后,利用RNAeasy™動物RNA抽提試劑盒(離心柱式)抽提RNA,隨后取相同體積的RNA樣品變性處理后,在含6.67%甲醛和適量NA-Red的1.2%變性瓊脂糖凝膠中進行電泳檢測。
本產品保存的組織樣品能用常規的RNA抽提方法進行RNA抽提,如Trizol法和離心柱法等,特別適用于RNAeasy™動物RNA抽提試劑盒(離心柱式)。使用時直接將樣品從RNALater™中取出當作普通的新鮮或凍存的樣品即可,少量殘留的RNALater™試劑不會影響后續抽提效果。
本產品也可用于組織中蛋白和DNA的穩定和保存,但RNALater™會導致蛋白變性,后續可進行Western Blot、SDS-PAGE等實驗,而不適用于檢測酶活力等須保持蛋白活性的實驗。如需保持蛋白酶活力,可以選用AllProtect™動物組織核酸、蛋白穩定保存液(R0121)。樣品從RNALater™中取出后可直接當作新鮮或凍存的樣品按照常規方法進行蛋白提取。
本產品100ml可以用于約100-200個重量為100mg樣品的保存,本產品500ml可以用于約500-1000個重量為100mg樣品的保存。
包裝清單:
產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
R0118-100ml | RNALater™動物組織RNA穩定保存液 | 100ml |
R0118-500ml | RNALater™動物組織RNA穩定保存液 | 500ml |
— | 說明書 | 1份 |
保存條件:
室溫或4℃保存,2年有效。
注意事項:
實驗中獲得的組織樣品適當處理大小后,應迅速并完全浸泡在RNALater™試劑中。
本產品適用于新鮮動物組織樣品或細胞中RNA的穩定與保存。樣品凍存后再用RNALater™保存的效果會比直接將新鮮樣品用RNALater™保存差很多。本產品盡管對于凍存的樣品也有一定的穩定保存作用,但更適合新鮮樣品。
用本產品保存后,樣品可能會變得微硬,為正常現象,不會影響后續RNA抽提時組織的勻漿、裂解等操作。
樣品如果需要-20℃或-80℃長期保存,應4℃保存過夜或更長時間后才能再轉移至-20℃或-80℃保存,以保證RNALater™試劑更加充分有效地完全浸入組織內部。
-20℃或-80℃保存情況下,樣品解凍時RNALater™試劑中可能有結晶析出,屬正常現象,可待結晶完全溶解后使用,不會影響后續RNA的抽提效果。
血液白細胞樣品按照常規方法分離后,可以參考細胞樣品的方法進行保存。
用于植物樣品保存時,應當去除表面蠟質,確保RNALater™試劑能充分進入組織內部。
本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明:
1. 對于組織樣品:
a. 保存:將組織剪切成長寬高均不大于0.5厘米的組織塊,迅速完全浸泡于5-10倍體積RNALater™試劑中(例如100mg組織需約0.5-1ml RNALater™試劑),此時室溫可以保存一周,4℃可以保存一個月,4℃至少保存過夜后可以在-20℃或-80℃保存3-5年。組織塊過大時,RNALater™試劑會出現不易充分滲透到組織中心處的問題,導致未充分滲透處RNA出現一定程度的降解。
b. RNA抽提時樣品的處理:用潔凈的鑷子將組織塊從RNALater™試劑中取出,紙巾吸除表面殘液,迅速置于適當裂解液中進行勻漿或液氮中進行研磨操作。后續即可采用離心柱法或Trizol等進行RNA抽提操作。
2. 對于細胞等樣品:
a. 保存:收集的新鮮細胞樣品用PBS洗滌后,5000g離心1-2分鐘,吸除PBS后小心加入5-10倍體積RNALater™試劑,避免將細胞沖起,然后置于相應溫度條件下保存備用。
注意:盡量保持細胞樣品處于緊實狀態,避免細胞重懸,否則可能會對后續RNA得率有一些影響。對白細胞、細菌、真菌樣品進行保存時,請參考細胞的方法進行。
b. RNA抽提時樣品的處理:加入與RNALater™試劑等體積的PBS或DEPC水,10,000g離心1分鐘收集細胞樣品,小心吸除上清液,后續即可采用離心柱法或Trizol進行RNA抽提操作。當保存樣品的RNALater™試劑的體積小于100μl時,可以直接加入RNAeasy™動物RNA抽提試劑盒(離心柱式)中的裂解液300μl,當RNALater™試劑的體積在100-200μl之間時可以直接加入600μl裂解液,隨后按照試劑盒的操作步驟提取總RNA。