pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc是自行研發(fā)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒，用于表達(dá)C端帶有Myc標(biāo)簽(EQKLISEEDL)的新冠病毒(SARS-CoV-2)毒膜(Membrane, M)蛋白，可以使用抗Myc標(biāo)簽的抗體來識(shí)別M蛋白的表達(dá)，或進(jìn)行免疫共沉淀分析等。該質(zhì)粒含有CMV啟動(dòng)子，可以高效啟動(dòng)目的蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)，質(zhì)粒為氨芐青霉素抗性。
M蛋白是冠狀病毒四個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白之一，由M基因編碼，含有3個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和一個(gè)保守結(jié)構(gòu)域。M蛋白是一種跨膜糖蛋白(membrane glycoprotein)，大部分結(jié)構(gòu)陷于膜內(nèi)。M蛋白N-端親水性末端突出于膜的外表面，C-端親水區(qū)位于病毒粒子內(nèi)部，能與病毒衣殼相互作用。M蛋白主要參與病毒組裝，促進(jìn)膜彎曲(curvature)以及結(jié)合至核衣殼(nucleocapsid)上。M蛋白的保守結(jié)構(gòu)域?qū)τ诓《狙b配非常重要，主要通過M-M、M-S和M-N蛋白相互作用，參與病毒復(fù)制裝配和出芽。此外，SARS-CoV M蛋白還能抑制I型干擾素的產(chǎn)生。
pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc質(zhì)粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 232-819 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 863-882 |
| Multiple cloning site | 895-922 |
| M protein | 923-1589 |
| Myc-tag | 1589-1618 |
| BGH pA | 1665-1889 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 1935-2363 |
| SV40 promoter | 2368-2711 |
| Neomycin resistance ORF | 2773-3567 |
| SV40 polyA signal | 3741-3871 |
| pUC origin | 4254-4924 |
| Ampicillin resistance ORF | 5069-6065 |
| bla promoter | 5964-5970 |
pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc質(zhì)粒(6065bp)的圖譜如下：
pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜見說明書：
pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc中沒有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc)包括：
| AfeI | AleI | AscI | AsiSI | BaeI | BamHI | BbvCI |
| BmgBI | BsgI | BsmBI | BspDI | BspEI | BstEII | BstXI |
| Bsu36I | ClaI | EcoNI | EcoRI | EcoRV | Esp3I | FseI |
| HpaI | NotI | PacI | PmlI | PshAI | SacII | SbfI |
| SfiI | SrfI | SwaI | XcmI |
pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc)包括：
| Acc65I | G`GTAC,C | 917 | NdeI | CA`TA,TG | 1161 |
| AflII | C`TTAA,G | 908 | NheI | G`CTAG,C | 1279 |
| AgeI | A`CCGG,T | 1151 | NruI | TCG|CGA | 1319 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 5142 | PaeR7I | C`TCGA,G | 1420 |
| ApaI | G,GGCC`C | 1638 | PciI | A`CATG,T | 1420 |
| AvrII | C`CTAG,G | 2691 | PflFI | GACN`N,NGTC | 1500 |
| BcgI | ,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` | 5647 | PflMI | CCAN,NNN`NTGG | 1656 |
| BglII | A`GATC,T | 12 | PluTI | G,GCGC`C | 484 |
| BlpI | GC`TNA,GC | 1199 | PpuMI | RG`GWC,CY | 895 |
| BmtI | G,CTAG`C | 899 | PspOMI | G`GGCC,C | 208 |
| Bpu10I | CC`TNA,GC | 180 | PspXI | VC`TCGA,GB | 1622 |
| BsaBI | GATNN|NNATC | 2760 | PstI | C,TGCA`G | 2954 |
| BseRI | GAGGAG(N)8,NN` | 2687 | PvuI | CG,AT`CG | 5512 |
| BsiWI | C`GTAC,G | 1235 | RsrII | CG`GWC,CG | 3417 |
| BsmI | GAATG,CN` | 3821 | SacI | G,AGCT`C | 818 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 1582 | ScaI | AGT|ACT | 5622 |
| BssHII | G`CGCG,C | 3298 | SexAI | A`CCWGG,T | 2458 |
| BstBI | TT`CG,AA | 3583 | SfoI | GGC|GCC | 2902 |
| BstZ17I | GTA|TAC | 3873 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 1151 |
| CspCI | ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 626 | SmaI | CCC|GGG | 2714 |
| DraIII | CAC,NNN`GTG | 2168 | SnaBI | TAC|GTA | 590 |
| EagI | C`GGCC,G | 2807 | SpeI | A`CTAG,T | 249 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 816 | StuI | AGG|CCT | 2690 |
| HindIII | A`AGCT,T | 911 | TspMI | C`CCGG,G | 2712 |
| KasI | G`GCGC,C | 2900 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 3019 |
| KpnI | G,GTAC`C | 921 | XhoI | C`TCGA,G | 1622 |
| MfeI | C`AATT,G | 161 | XmaI | C`CCGG,G | 2712 |
| NarI | GG`CG,CC | 2901 |
pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc質(zhì)粒中推薦使用的測序引物序列如下：
pcDNA3.1 primer (829-848): 5'- CTAGAGAACCCACTGCTTAC -3'
BGH pA primer (1659-1676): 5'- TAGAAGGCACAGTCGAGG -3'
pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc的全序列信息
包裝清單：| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| D2941-1μg | pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc | 1μg |
| D2941-100μg | pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc | 100μg |
| — | 說明書 | 1份 |
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：本質(zhì)粒未經(jīng)書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 首次使用1μg包裝的本產(chǎn)品時(shí)，請(qǐng)先取少量本質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，進(jìn)行質(zhì)粒小量、中量或大量抽提后再用于后續(xù)用途。抽提獲得的質(zhì)粒可以通過酶切電泳進(jìn)行鑒定，或通過測序進(jìn)行鑒定。
2. 100μg包裝的本產(chǎn)品質(zhì)粒濃度為0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切或者轉(zhuǎn)染細(xì)胞。
