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cDNA 第二鏈合成試劑盒

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 cDNA 第二鏈合成的原理是用 RNase H 使 RNA-DNA 雜合鏈中的 RNA 生切口,再用 DNA Polymerase I 通過切口平移(nick translation)反應進行RNA 鏈取代合成 cDNA 第二鏈,

本產品具有下列特點:

1. 即開即用,含有合成 cDNA 第二鏈的所有試劑包括 RNase HE.coli DNA聚合酶 1 DNA ligase

2. 一管式操作,不需要每次進行純化,不丟失寶貴樣品。

3. 所得雙鏈 cDNA 可以直接用于后續的常規 PCRreal-time PCRcDNA文庫構建、抑制性差減雜交等。

 

本試劑盒足夠 30  80uL 體系的 cDNA 第二連合成反應。

 

成分

編號

十孔盒包裝

5×cDNA 第二鏈合成緩沖液

131005a

250 μL

20×cDNA 第二鏈合成酶混合液

131005b

60 μL

0.5 M EDTA 溶液

130309

60 μL

超純水

100935

1 mL

使用手冊

131005sc

1

 

低溫運輸,-20保存,有效期一年

 

cDNA 第一鏈合成試劑等

一、合成 cDNA 第一條鏈

本試劑盒不提供 cDNA 第一鏈合成試劑,用戶需自備相關試劑合成 cDNA

第一鏈。

二、合成 cDNA 第二鏈

 

1. 在冰浴上向 5uL 已經完成 cDNA 第一條鏈合成的反應體系逆轉錄體系 中依次加入下表試劑,如果多于 5uL,請只取用 5uL

注:克隆雙鏈 cDNA 一般需要平末端化,需要此步處理。PCRSSH 等后續處理一般不需要把雙鏈 cDNA 平末端化,則可以跳過T4 DNA 聚合酶處理步驟, 直接用 EDTA 終止反應。

1. 電泳 5 μL 檢測 cDNA 質量。如果 cDNA  0.5-10Kb 的范圍內呈模糊一片,則 cDNA 合格。如果沒看見 cDNA 或有其他異常,需查找原因后再繼續。

2. 所得 cDNA 可以直接用于后續的常規 PCRreal-time PCRcDNA 文庫

 

構建、抑制性差減雜交(SSH)等實驗

 

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