cDNA 第二鏈合成的原理是用 RNase H 使 RNA-DNA 雜合鏈中的 RNA 產生切口,再用 DNA Polymerase I 通過切口平移(nick translation)反應進行RNA 鏈取代合成 cDNA 第二鏈,
本產品具有下列特點:
1. 即開即用,含有合成 cDNA 第二鏈的所有試劑(包括 RNase H、E.coli DNA
2. 一管式操作,不需要每次進行純化,不丟失寶貴的樣品。
3. 所得雙鏈 cDNA 可以直接用于后續的常規 PCR、real-time PCR、cDNA
本試劑盒足夠 30 次 80uL 體系的 cDNA 第二連合成反應。
成分 | 編號 | 十孔盒包裝 |
5×cDNA 第二鏈合成緩沖液 | 131005a | 250 μL |
20×cDNA 第二鏈合成酶混合液 | 131005b | 60 μL |
0.5 M EDTA 溶液 | 130309 | 60 μL |
超純水 | 100935 | 1 mL |
使用手冊 | 131005sc | 1 份 |
低溫運輸,-20℃保存,有效期一年
cDNA 第一鏈合成試劑等
一、合成 cDNA 第一條鏈
本試劑盒不提供 cDNA 第一鏈合成試劑,用戶需自備相關試劑合成 cDNA
第一鏈。
二、合成 cDNA 第二鏈
1. 在冰浴上向 5uL 已經完成 cDNA 第一條鏈合成的反應體系(逆轉錄體系) 中依次加入下表試劑,如果多于 5uL,請只取用 5uL:
注:克隆雙鏈 cDNA 一般需要平末端化,需要此步處理。PCR、SSH 等后續處理一般不需要把雙鏈 cDNA 平末端化,則可以跳過T4 DNA 聚合酶處理步驟, 直接用 EDTA 終止反應。
1. 電泳 5 μL 檢測 cDNA 質量。如果 cDNA 在 0.5-10Kb 的范圍內呈模糊一片,則 cDNA 合格。如果沒看見 cDNA 或有其他異常,需查找原因后再繼續。
2. 所得 cDNA 可以直接用于后續的常規 PCR、real-time PCR、cDNA 文庫
構建、抑制性差減雜交(SSH)等實驗