非洲豬瘟(African Swine Fever、ASF)是由非洲豬瘟病毒(African Swine Fever Virus、ASFV) 引起豬的一種急性、熱性、高度接觸傳染性疾病，病死率幾乎高達 100%，ASF 最近在我國爆發，給我國養豬業造成重大損失，因此ASFV 的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用，為此本公司開發了簡單快捷的 ASFV 可視化 LAMP 檢測試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA。
2. 用 LAMP 恒溫擴增法擴增 ASFV 特異片段，不需要熒光 PCR 等貴重儀器。同時擴增時間只需要 1 小時，尤其適合現場或實驗條件簡陋的單位使用。
3. 檢測靈敏性比PCR 高 10 倍以上。
4. 特異性高，由于使用四條針對 ASFV 保守基因的特異引物，比使用 2 條引物的PCR 專一性更高。
5. 每個反應的線性范圍：10E2-10E7拷貝/μL ,
6. 最低靈敏度：10 拷貝/μL 。
7. 提供無傳染性的陽性對照，便于分析實驗結果。
本試劑盒足夠做 50 次 20μL 體系的 LAMP 擴增。本產品只能用于科研。
| 成份 | 編號 | 十孔盒包裝 |
| 2×可視化UNG-LAMP MagicMix | 180703a | 500μL（綠蓋） |
| 非洲豬瘟病毒 LAMP 引物混合液 | 16-23000yw | 200μL（白蓋） |
| 非洲豬瘟病毒 LAMP 陽性對照 （1×10E8 拷貝/μL） | 60908-23000pc | 50μL（黃蓋） |
| 使用手冊 | 16-23000sc | 1 份 |
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。非洲豬瘟病毒陽性對照 2.0 最好單
獨放置，不要污染其他試劑。
待測樣品
一、樣品 DNA 的制備
1. 用自選方法純化病毒樣品DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼容，包括本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。
2. 如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個樣品制備，包括一個樣品制備陽性對照（PC）和一個樣品制備陰性對照（NC）。樣品使用量根據所選擇的試劑盒決定。如果樣品使用量為 XmL，則在 XmL 水中加 10μL MRSA LAMP陽性對照的10000倍稀釋液作為樣品制備陽性對照。樣品制備陰性對照是直接用 X mL 水作為 陰性對照，然后和 N 個樣品一起進行細菌 DNA 提取操作。得到N+2個DNA樣品。
二、LAMP（20μL 體系）
反應設置：如果有 N+2 個 DNA 純化樣品，則最好設置 N+4 個 LAMP 擴增，增加一個 LAMP 陰性對照和 LAMP 陽性對照。在 N+2 個PCR 管中加入下列成分：
| 成分 | N+2 個 樣品管 | 陰性對 照管 | 陽性對 照管 |
| 2× 可視化 UNG-LAMP MagicMix | 各 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 非洲豬瘟病毒LAMP 引物 混合液 | 各 4μL | 4 μL | 4 μL |
| N+2 樣品 DNA 模板 | 各 6 μL | - | - |
| LAMP 陰性對照（水） | - | 6 μL | - |
| LAMP 陽性對照（用非洲豬瘟病毒LAMP 陽性對照的 100 倍稀釋液） | - | - | 6 μL |
2. 混勻，此時反應液呈現非常淺的藍色，由于是否有反應是跟陰性對照和反應前對比，所以一定要設置陰性對照，并且反應前要手機照相留存以供反應后比對。
3. 置于25℃5分鐘（讓UNG滅活可能的LAMP的污染），然后放63℃擴增60-120分鐘（如果不使用Loop引物，則最好保溫2小時）。如果是在PCR 儀中保溫，必須加熱蓋。如果用金屬浴保溫，沒有熱蓋，必須在孔中加水以填充孔和管子間的空隙，并且在管中加50uL石蠟油，否則保溫期間反應體系的水分會蒸發，影響反應效率）。
4. 80℃10分鐘滅活Bst DNA聚合酶和UNG酶。
5. 將反應管放置在白色背景（如白紙）前觀察，觀察反應液顏色并用手機照相留底。
實驗結果分析。陽性對照將呈現藍色，無模板的陰性對照將呈現無色或非常淺的藍色，樣品管的顏色如果接近陽性對照則說明有擴增，如果接近陰
性對照則說明無擴增。標準的反應結果如下圖（9 號為陰性，10 號為陽性，此處的 9 號和 10 號跟下步的電泳照片中的 9 號和 10 號是相同的兩個樣品）：
9. 如果需要也可以電泳確認實驗結果：取 10μL LAMP 擴增產物直接進行 2%瓊脂糖凝膠電泳（本產品不需要單獨加 loading buffer），最好使用 100 bp DNA Marker。如果樣品為陽性，將會得到長度為 200bp 的梯形擴增產物。典型的電泳結果見下表（奇數樣為陰性結果，偶數樣為陽性結果。此處的 9 號和 10 號跟上步照片中的 9 號和 10 號是相同的兩個樣品）
10. 注意消除環境污染，LAMP 產物易產生氣溶膠，飄在空氣中影響下一次實驗，建議反應結束后，用紫外滅菌。先加好除陽性對照和樣品以外的其它溶液，到另一個房間添加陽性對照及樣品，可有效防止引物、MagicMix
被污染。
