白色念珠菌 PCR 試劑盒(Canidia albicans)又叫白假絲酵母菌是一種真菌,通常存在于正常人口腔,上呼吸道,腸道及陰道,一般在正常機體中數量少,不引起疾病,當機體免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制約作用失調,則本菌大量繁殖并改變生長形式(芽生菌絲相)侵入細胞引起疾病。其中包括皮膚念珠菌病(好發于皮膚皺褶處,皮膚潮紅、潮濕、發亮,有時蓋上一層白色或呈破裂狀物,病變周圍有小水泡)、粘膜念珠菌病(以鵝口瘡、口角炎、陰道炎最多見)、內臟及中樞神經念珠菌病(可由粘膜皮膚等處病菌播散引起,有肺炎 腸胃炎、心內膜炎、腦膜炎、腦炎等,偶爾也可發生敗血癥)。因此快速靈敏檢測梭狀芽孢桿菌具有重要的意義,本試劑盒就是為此目的根據 PCR 原理開發, 它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供細菌 DNA 模板。
2. 引物經過精心優化,專一性強,只擴增白色念珠菌 DNA。
3. 提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的PCR 50 次。
本產品只能用于科研。
成份 | 編號 | 十孔盒包裝 |
PCR MagicMix 3.0 | 90805 | 1 mL(紅蓋) |
超純水 | 100935 | 1 mL(亮黃蓋) |
白色念珠菌 PCR 引物混合液 | 13-60210yw | 100 μL(白蓋) |
白色念珠菌 PCR 陽性對照 (1×10E8 拷貝/μL) | 13-60210pc | 50 μL(黃蓋) |
天凈沙核酸釋放劑試用裝 | 61202 | 20 次(1mL、綠蓋) |
使用手冊 | 13-60210sc | 1 份 |
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置,不要污染其
他試劑。
一、樣品 DNA 的制備
1. 如果有 N 個樣品,必須設置 N+2 個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)。可以用 10μL 陽性對照的 100 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為 PC。另外用水作為 NC
2. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數細菌 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的細菌 DNAout 或柱式細菌 DNAout。本試劑盒免費贈送 20 次免 DNA 提取的天凈沙核酸釋放劑,本產品的裂解液可以直接作為 PCR 模板,省略了 DNA 提取步驟。
二、設置 PCR 反應(40 μL 體系)
對 N+2 個樣品,在PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照,故需要設置 N+4 個反應。在 N+4 個PCR 管中分別加入下列成分
成分N+2 個PCR 陰性PCR 陽性
樣品管對照對照
PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL白色念珠菌 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL N+2 個樣品 DNA 模板各 18 μL - -
樣品制備陰性對照(超純水) - 18 μL -
樣品制備陽性對照(白色念珠菌 -- 18 μL陽性對照的 10000 倍稀釋液)
2. 按下表設置 PCR 反應:
三、電泳檢測
2. 取 10-20 μL PCR 產物。電泳檢測 PCR 產物。本產品提供的 PCR Mix在擴增結束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。預期的 PCR產物長度為 263bp。陽性對照必須有此條帶出現,陰性對照必須無任何擴增,否則實驗無效。對沒有擴增產物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復 PCR
擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。