| 人單純皰疹病毒 I 型熒光定量 PCR 檢測試劑盒(染料法)（Herpes Simple Viruses， HSV）屬于皰疹病毒科 a 病毒亞科， | ||||||||||||||||||||||||
| 為雙股 DNA 病毒，皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛，可感染人類和其他脊椎動物。對人 | ||||||||||||||||||||||||
| 的感染通過人與人接觸傳染。根據抗原性的差別目前把 HSV 分為 1 型和 2 型。1 型主 | ||||||||||||||||||||||||
| 要由口唇病灶獲得，2 型可從生殖器病灶分離到。從發生后四個月到數年被感染的人數 | ||||||||||||||||||||||||
| 可達人口總數的 50-90%，是最易感染人的一種病毒。因此對 HSV-1 的快速診斷具有 | ||||||||||||||||||||||||
| 重要的意義。本產品就是根據 HSV-1 保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定量 PCR | ||||||||||||||||||||||||
| 產品。本試劑盒具有下列特點： | ||||||||||||||||||||||||
| 1.根據 HSV-1 的 gD 基因設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。 | ||||||||||||||||||||||||
| 2.靈敏度比常規 PCR 高 2-3 個數量級，可以達到幾百拷貝/反應。 | ||||||||||||||||||||||||
| 3.即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡單，定量準確快速。 | ||||||||||||||||||||||||
| 4.一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續污染。 | ||||||||||||||||||||||||
| 5.本試劑盒足夠 100 次 20uL 反應體系的熒光定量 PCR。 | ||||||||||||||||||||||||
| 6.本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
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低溫運輸、-20℃保存(A 袋和 B 袋的試劑放樣品準備區、C 袋的陽性對照最好分開放置)，
DNA 模板、10×ROX（根據機型決定，具體見使用方法）。
一、樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。本 試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）
按引物標簽提示在裝引物干粉的管中直接加入適量的超純水（加入量見引物試管上
的標簽），使得兩條引物的濃度均為 10μM（10 pmol/μL），然后各取 110μL 混合在一起得 220μL，標注為引物混合物，放冰上待用。220μL 足夠 100 次 qPCR 反應。
三、稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，
因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成 分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照， 只提供可以直接使用的長為 52bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
3.標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
4.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（最好用帶芯槍頭，下同）。
5.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得
1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)， 充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
8.換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得
1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
9.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。 三、設置 qPCR 反應（20 μL 體系，在樣品制備室進行）
10. 在 PCR 管中加入下列成分（待測樣品需要做三次重復，下表只列出一次。樣品管 和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子 儲存好后最后加）：
| 成分 | 樣品 | 陰性對照 | 陽性對照（2-7 管） |
| 2×qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 引物混合物 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 自備 10×ROX (見注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 待測樣品 DNA 模板 | 1-5 μL | 不加 | 不加 |
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陽性對照（2-7 號） |
不加 |
不加 | 各 5μL（2 號樣到 2 號管，3 號樣到 3 號管…） |
| 補水到 | 20 μL | 20 μL | 20 μL |
注:僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對照，其他熒光 PCR 儀
| 器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene | |||||||||||||
| 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。 | |||||||||||||
| 11. 蓋上蓋子后上機，按下面參數進行 PCR（具體 PCR 參數可以根據儀器不同而自行 | |||||||||||||
| 優化）。
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