牛腺病毒 3 型熒光定量 PCR 檢測試劑盒牛血清的質量控制標準中有一項重要的指標是病毒的檢測。比較常見的易感染奶牛和肉牛的病毒如 DNA 病毒：牛腺病毒 3 型（Bobine Adenovirus Type 3，BAV-3），主要引起牛的呼吸道和腸道疾病，其主要特征為肺炎、腸炎、結膜炎和多發性關節炎，是犢牛死亡的重要原因之一。其易感和潛伏性給畜牧業及其國際帶來嚴重的經濟損失，同時，給細胞培養以及相關基礎研究帶來一定的問題。因此，病毒的快速檢測是控制牛血清質量的前提，除了傳統的培養傳代觀察細胞病變，血清學診斷技術外，我們在這里引入熒光定量 PCR 的方法，來快速檢測血清樣品中是否污染有 BAV-3。本產品是根據 BAV-3 核酸序列的保守區 pol蛋白酶設計引物，定制的一種檢測 BAV-3 的熒光定量 PCR 試劑盒。它具有下列
特點：
1.即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板即可使用。
2.快捷，整個 PCR 過程只要一小時。
3.靈敏度達達 100copies/reactlon 水平。
4.熒光 PCR mix 中含第二代飽和型熒光染料，效果好于 SYBR Green I。
5.密封體系，極大降低了假陽性。
本產品跟各種熒光 PCR 儀器兼容
| 成 份 | 編號 |
| 50 次塑料袋包裝 |
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| 2×熒光 PCR Mix | 90408 |
| 1.5 mL |
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| BAV-3 專一性引物一 | yw1277 |
| 100 uL |
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| BAV-3 專一性引物二 | yw1278 |
| 100 uL |
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| BAV-3 標準品 | yw12791280 |
| 40 uL |
| （1.27×10E11 拷貝/uL） |
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| DNA 稀釋液 | 121206-10 |
| 10mL |
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| 超純水 | 100935 |
| 1 mL |
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| 使用手冊 |
| 1 份 | |
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。
一、樣品 DNA 的制備（本試劑盒不含所需試劑）
用自備試劑抽提病毒樣品 DNA。注意：可以選用本公司的病毒 DNAout 或柱 式病毒 DNAout。
二、熒光 PCR 反應（25 uL 體系）
1. 配制標準品，用 DNA 稀釋液將 BAV-3 標準品（1.27X10E11 拷貝/uL）稀
釋到不同的濃度，每個濃度差 10 倍，共 8-10 個梯度。此標準品系列將用于 制作標準曲線。
2. 設置 PCR 反應：在 PCR 管中加入下列成分（N 取決于上步的稀釋梯度由客 戶自己決定）：
| 成分 | 樣品管 | 標準坪梯度 | 陰性對照 |
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| （共 8-10 管） |
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| 2×熒光 PCR Mix | 12.5 uL | 12.5 uL 每管 | 12.5 uL |
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| 待檢測樣品 DNA（自備） | 1-5 uL | 無 | 無 |
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| 標準品(8-10 個梯度) | 無 | N uL 每管 | 無 |
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| BAV-3 專一性引物一 | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
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| BAV-3 專一性引物二 | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
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| 補超純水到 | 25 uL | 25 uL | 25 uL |
3. 上機進行熒光定量 PCR。熒光定量 PCR 反應參數如下（以 ABI7500 熒光定 量 PCR 儀為參考）：
| 過程 | 溫度 | 時間 |
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| 預變性 | 94℃ | 2 min |
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| 兩步式 PCR 反應 | 94℃ | 30 s |
| （40 個循環） |
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| 60℃ | 90 s |
4. 根據 8-10 管標準品的 Ct 值（x 軸）和濃度（y 軸）描出標準曲線，再根據 待測樣品的 Ct 值技術按出樣品的濃度。
