分 187 種亞型。。大腸桿菌 O 抗原即脂多糖(LPS),對其多樣性的分析對流 行病學研究和疾病監控預測有重要意義。目前已知大腸桿菌 O 抗原的編碼基 因位于 rfb cluster,本產品就是根據 O1 亞型基因保守序列設計引物并開發的 O1 型大腸桿菌專一性 PCR 診斷試劑盒。它具有下列特點:
1.使用即用型 PCR 試劑盒,客戶不需要準備各個成分,減少了操作步驟, 降低了操作誤差。
2. 專一性強,只檢測 O1 型大腸桿菌,對其他 O 型大腸桿菌無交叉反應。
3. 靈敏度高,每次 PCR 反應最低可以檢測數百拷貝 O1 型大腸桿菌基因組。
4. 本產品足夠至少 50 次 PCR 檢測(40uL 體系,含陽性對照和陰性對照)。
成份 | 編號 | 十孔盒包裝 |
即用型 PCR Mix 3.0(含染料) | 90805a | 1 mL(A 袋) |
超純水 | 100935 | 1 mL(A 袋) |
E.coli O1 專一性引物 F | YW11-690f | 1 OD(B 袋) |
E.coli O1 專一性引物 R | YW11-690r | 1 OD(B 袋) |
E.coli O1 陽性對照,10E8 拷貝/uL | PC11-690 | 50 uL(C 袋) |
使用手冊 | 11-690sc | 1 份 |
低溫運輸、-20℃保存,有效期一年。E.coli O1 陽性對照濃度很高,所以收
到貨后 E.coli O1 陽性對照需要分開放置,避免污染其他試劑和實驗環境。
樣品 DNA。
使用方法一、樣品 DNA 的制備
用自選方法純化 E.coli 的 DNA,也可以另購本公司的細菌 DNAout,此 產品跟本試劑盒兼容。
二、引物的制備
1. 按引物標簽提示在裝引物干粉的管中直接加入適量的超純水(加入量見引 物試管上的標簽),使得兩條引物的濃度均為 10μM(10 pmol/μL),然 后各取 110μL 混合在一起得 220μL,標注為引物混合物,放冰上待用。 220μL 足夠 100 次 PCR 反應。
三、陽性對照
2. 為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性 對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 E.coli O1 專一的 DNA片 段作為陽性對照。
使用本陽性對照時,由于其濃度較高,用前最好梯度稀釋到 1000 拷貝
/uL。處理陽性對照時最好在專門的區域操作。一定要注意不要污染其他 試劑和成分。
三、設置 PCR 反應(40 uL 體系)
7. 根據樣品數 N,設置 N+2 個 PCR 反應(一個是陽性對照,一個是陰性對 照)。在 N+2 個 PCR 管中分別加入下列成分
電泳檢測 PCR 產物。本 PCR mix 含上樣液,故不需要另外加上樣液。 預期的 PCR 產物長度為 1090 bp。陽性對照應該出現 1090 bp 片段, 陰性對照不應該出現 1090 bp 片段,否則實驗無效