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通用型全基因組擴增試劑盒

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 通用型全基因組擴增試劑盒是用于基因組DNA擴增全基因組的試劑盒,可以方便、簡單、快速、經濟的得到穩定產量的基因組DNA擴增樣品。本產品有如下優點:

  1. 基于phi29 DNA聚合酶的高保真性、高合成率和超強鏈取代能力。
  2. 可以擴增基因組達上萬倍,具有高產量和高保真性的特點。
  3. 可使用各種來源的樣品,包括全血,干血,發根,口腔粘膜刮液培養細胞, 真菌和病毒等。
  4. 操作簡便快捷,恒溫30℃)反應,無須PCR儀即可實現擴增。
  5. 產物可用于多種后續試驗,包括多重PCR、長片斷PCR、定量PCR、克隆、 文庫構建、單倍型分析、測序、基因芯片分析、各種遺傳分析片段差異,

微衛星差異,SNP,STR)等。

成 份 編 號 十孔盒包裝
變性液 100941a 62.5 uL
中和液 100941b 125 uL
WGA Mix 100941c 250uL
Phi 29 DNA 聚合酶10U/uL 100941d 12.5uL
使用手冊 100941sc 1 份

 

自備試劑 超純水(無 DNA 和 DNase 污染)
運輸及保存 低溫運輸、-20℃保存, 有效期一年。
使用方法 本產品適用于純化好的基因組DNA。

一、堿變性(堿變性法一般好于熱變性法,推薦用戶使用)

  1. PCR 塑料管中加入不超過 2.5uL 純化好的基因組DNA 或用量在100pg-100ng之間。如果體積不足2.5uL,則用超純水補齊。最好同時做 一個不加DNA模板的陰性對照。
  2. 加入等體積2.5μL)變性液,輕柔吹打混勻。

  1. 室溫放置2-5分鐘。
  2. 加入5uLWGA中和液。此時樣品總體積為10uL。二、WGA反應
  3. 10uL DNA樣品中,加入10 μL WGA Mix,輕柔吹打混合均勻。
  4.  
  5. 加入0.5 uL Phi 29 DNA聚合酶10U/uL)輕柔吹打混合均勻。
  6.  
  7. 30℃保溫3-12小時。最好使用PCR儀進行30℃保溫并打開熱蓋保溫。如果采用30℃水浴,最好在樣品管中加入30-50uL石蠟油以防水分蒸發,因      30℃長時間的水浴也能使水分蒸發到管壁,從而改變反應體系中各成分的濃度、降低WGA反應效率。如果模板DNA量比較高,WGA三小時即可檢測到DNA擴增。
  8. 65℃保溫10分鐘使phi29 DNA聚合酶滅活。注:由于phi29 DNA聚合酶DNA外切活性,所以最好將其滅活以免干擾后續反應。
  9. 立即取5-10 uL WGA反應液進行電泳檢測擴增效果。

  10. 擴增的DNA可以用于后續試驗或當冰箱長期保存
  11. 用本產品擴增 10 ng 純化好的藻基因組DNA,反應體系為 10 μL,擴增時間為 8 h。 5 μL 樣品電泳,第一泳道為 Marker(大片段為 15  Kb,第 2~5 泳道擴增樣品的引物濃度分別為 100,200,300,400 μM染料為綠如藍核酸染料
  12. WGA 原理圖圓球表示phi 29DNA 聚合酶
    短藍線表示隨機引物
    棕色線表示新合成的DNA
     

 

 
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